贵州野生松乳菇多糖提取、纯化与生物活性的研究

摘要

本研究对贵州野生松乳菇[Lactarius deliciosus(Fr) Gray]水溶性多糖(SRG)的提取分离纯化进行研究，并初步探讨其多糖的抗氧化作用以及在降血脂、抗疲劳等方面的生物活性。
　　一、松乳菇多糖提取分离纯化研究得到如下结果：
　　1、松乳菇样品预处理
　　70％乙醇浸泡的样品超声30min后静置24h。
　　2、松乳菇多糖的热水浸提工艺
　　热水浸提工艺条件:提取温度90℃、浸提时间3h、料液比1:30、浸提次数3次，浸提率达到7.55％。
　　3、松乳菇多糖的酶解+热水浸提法工艺
　　酶解反应工艺条件为：固液比：1:20，反应温度：50℃，反应时间：2h，提取次数：2次，加酶量：0.4％。酶解反应结束后升温至70℃，提取残渣中多糖采用70℃热水，浸提2h，固液比为1:20，浸提一次，最终提取率可达13.31％。
　　4、松乳菇多糖的活性炭脱色效果
　　1％的活性炭在30℃下，脱色90min，可脱去大部分色素而多糖的损失率则小于15％。
　　5、乙醇沉淀条件及效果
　　70％乙醇沉淀松乳菇多糖溶液，沉淀率可达81.9％。
　　6、大孔树脂纯化松乳菇多糖
　　选用AB-8型（规格30mm×300mm）大孔吸附树脂对松乳菇多糖进行分离纯化。纯化条件为：上样浓度：0.2mg/mL；洗脱速度：2mL/min；NaCl溶液浓度：0.2mg/mL。可把含量为61.3％粗多糖提高至含量为81.5％。
　　7、松乳菇多糖的DEAE-纤维素柱分离
　　纯化的松乳菇多糖上DEAE-纤维素柱，用不同洗脱液洗脱，蒸馏水洗脱得一种中性多糖SRG-1，0.1mol/L、0.2mol/L和0.3mol/LNaCl溶液分别洗脱得三种不同的酸性多糖SRG-2、SRG-3、SRG-4。
　　8、松乳菇多糖的单糖组分研究
　　采用气相色谱法测定SRG-2的单糖组分，结果表明其主要是由D-甘露糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-木糖、D-阿拉伯糖、D-岩藻糖六种单糖组分组成。
　　二、松乳菇多糖生物活性研究得到如下结果：
　　1、松乳菇多糖抗氧化性试验结果：SRG对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基皆表现出很好的清除效果，100μg/mL样品浓度的清除率分别达到了76.8％，80.1％，72.6％。
　　2、松乳菇多糖的降血脂试验结果：采用高、中、低浓度的松乳菇多糖饲养小鼠，结果表明低剂量组小鼠血清中TC，LDL-C，TG值与模型组比较分别降低了：19.8％，27.2％，25.9％。中剂量组小鼠血清中TC，LDL-C，TG值与模型组比较分别降低了：31.7％，36.8％，42.4％。高剂量组小鼠血清中TC，LDL-C，TG值与模型组比较分别降低了：32.7％，39.2％，43.0％。
　　3、松乳菇多糖的抗疲劳试验结果：采用高、中、低浓度的松乳菇多糖为受试物，结果表明其中低剂量SRG组、中剂量SRG组与高剂量SRG组比对照组负重游泳的时间分别延长15.9％，32.8％，45.9％。
　　4、通过生物活性实验，结果显示松乳菇多糖抗氧化作用明显及在降血脂、抗疲劳等方面均表现出明显的促进作用。

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英文摘要

第一章 文献综述

1.1 前言

1.2 真菌多糖的研究进展

1.3 松乳菇的研究状况

1.4 论文的目的、意义与主要研究内容

第二章 松乳菇多糖的分离纯化工艺研究方法

2.1 实验材料、试剂与仪器

2.2 实验方法

第三章 松乳菇多糖的分离纯化工艺研究结果与讨论

3.1 松乳菇样品预处理对比实验

3.2 松乳菇水溶性多糖提取

3.3 Sevag 法除蛋白

3.4 松乳菇多糖的活性炭脱色

3.5 醇沉浓度实验

3.6 大孔吸附树脂纯化松乳菇多糖

3.7 透析法除小分子杂质

3.8 松乳菇多糖的 DEAE-纤维素柱层析

3.9 松乳菇多糖的纯度测定

3.10 气相色谱法测定松乳菇多糖的单糖组成

3.11 松乳菇多糖的理化性质研究

3.12 小结

第四章 松乳菇多糖生物活性的研究

4.1 松乳菇多糖抗氧化作用的研究

4.2 松乳菇多糖对实验小鼠降血脂作用研究

4.3 松乳菇多糖对实验小鼠的抗疲劳实验

4.4 小结

第五章 总 结

致谢

参考文献

附 录

图 版

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