广东省家族性和早发性乳腺癌BRCA1和BRCA2基因突变的研究

摘要

乳腺癌是中国女性最常见的癌症之一，它的发病率及死亡率在逐年递增。据研究表明，乳腺癌的发生发展主要与环境、遗传等因素有关。其中，与遗传有关的乳腺癌被称为遗传性乳腺癌，其大多数具有家族聚集性，属于家族性乳腺癌。遗传性乳腺癌约占整个乳腺癌人群的5-10﹪，其中与遗传性乳腺癌相关的基因有BRCA1、BRCA2、P53、PTEN、ATM等，而与BRCA1、BRCA2基因相关的乳腺癌约占遗传性乳腺癌的45﹪。另外，还有研究发现，在年龄小于35岁，无家族史的早发性乳腺癌患者中，BRCA1、BRCA2基因的突变率约为10﹪，远远高于散发性乳腺癌中BRCA1、BRCA2基因的突变率。在欧美国家，许多研究表明家族性和早发性乳腺癌与BRCA1、BRCA2基因多个位点的突变有关。在亚洲的一些国家如韩国、日本，亦已开展类似的研究，且发现乳腺癌相关的BRCA1、BRCA2基因突变位点与欧美国家不同，在中国，香港、上海等地也开展了类似的研究，并分别发现了其他研究未报道的BRCA1，BRCA2基因突变位点，这也说明BRCA1、BRCA2基因突变存在种族、地域差异。那么在广东省乳腺癌患者中BRCA1、BRCA2基因突变情况如何呢?但到目前为止，尚无关于广东省乳腺癌人群：BRCA1和BRCA2基因突变研究的报道。本研究即检测了广东省家族性乳腺癌和早发性乳腺癌家系中，BRCA1和BRCA2基因所有外显子及外显子内含子拼接区域基因的突变情况，以期通过对BRCA1和BRCA2基因突变情况的了解，而获得日后针对乳腺癌患者及其家属的个性化治疗或干预措施。材料和方法 1.样本 入组标准为：乳腺癌患者并且满足下列条件之一：(1)有血缘关系的直系亲属中有一个或一个以上的乳腺癌患者，或(2)乳腺癌患者诊断年龄小于35岁。本研究中共收集58个符合入组条件的乳腺癌患者，其中41例早发性乳腺癌，17例家族性乳腺癌。每个入组患者均需抽取5ml外周静脉血置于含有800mlACD的抗凝管内保存。 2.提取DNA 根据DNA提取试剂盒上的标准提取方法，从外周静脉血中提取基因组DNA。多聚酶链式反应(PCR)设计能够覆盖BRCA1，BRCA2整个编码区及拼接区的引物，PCR反应体系为50μl，PCR反应过程为95℃5分钟，94℃30秒，(63℃到54℃)(-0.5℃/循环)30秒，72℃30秒，15循环；94℃30秒，56℃30秒，72℃30秒，25循环；72℃10分钟 4．变性高效液相色谱(DHPLC) 变性高效液相色谱(Denaturing High Performance Liquid Chromatography，DHPLC)能够检测PCR产物的突变情况。根据BRCA1和BRCA2每个扩增片段不同的碱基组成，应用机器自带的Navigator 软件进行自动分析，以确定不同分析条件。PCR扩增产物经变性退火过程以促进异源双联的形成，直接置于仪器内进行基因突变的检测。DHPLC检测基因突变的原理在于与同源双链PCR产物相比异源双链：PCR产物在分析柱内的滞留时间不同，从而使突变造成的异源双链表现出的不一致峰型。 5.DNA直接测序 虽然DHPLC可以检测基因突变，但目前，DNA直接测序(direct sequenceingof DNA fragment，DS)仍是检测基因突变的金标准。对于DHPLC发现的异常的PCR．产物片断，应用模板DNA重新一次PCR后，将扩增产物送基因公司进行测序。 6.数据分析 根据人类基因组上所提供的野生型BRCA1和野生型BRCA2明确突变位点，并在BIC(breast cancer information core)网站上明确突变位点的特异性。 结果 1.在本研究中，发现BRCA1突变包括2个疾病相关性突变，5种错义突变，5种核苷酸多态性，而BRCA2突变包括3个疾病相关性突变，7种错义突变，6种核苷酸多态性。 2.BRCA1突变多见于早发性乳腺癌，ER/PR(+)乳腺癌，而BRCA2突变中，疾病相关性突变多见于家族性乳腺癌，ER/PR(+)乳腺癌，CerbB2(+)，腋窝淋巴结转移个数≤3个的乳腺癌，其它突变类型多见于早发性乳腺癌，ER/PR(+)乳腺癌，腋窝淋巴结转移个数≤3个的乳腺癌。 3.在早发性乳腺癌，ER/PR(+)乳腺癌中，出现BRCA1突变的机率更大。而在家族性乳腺癌，ER/PR(+)乳腺癌，CerbB2(+)，腋窝淋巴结转移个数≤3个的乳腺癌，出现BRCA2疾病相关性突变机率大，而在早发性乳腺癌，ER/PR(+)乳腺癌，腋窝淋巴结转移个数≤3个的乳腺癌中，出现BRCA2其他突变类型的机率较大。 结论 1.在广东省，早发性乳腺癌BRCA1和BRCA2突变率均低于西方人群和中国其他地区人群。 2.在广东省，家族性乳腺癌BRCA1突变率低于西方人群和中国其他地区，但其BRCA2突变率与西方人群相似，高于中国其他地区人群。 3.在广东省家族性和早发性乳腺癌中，ER/PR(+)及腋窝淋巴结转移个数≤3个的乳腺癌，出现BRCA1/BRCA2突变的比率高，可考虑将这二个条件做为乳腺癌进行BRCA1，BRCA2突变检测的筛选条件，提高突变检出率。

目录

文摘

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材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

附表

附图

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致谢

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