rhTNK-tPA冻干粉针剂放大生产的冻干工艺研究

摘要

研究目的：
　　通过对注射用重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂（Recombinant Human TNK Tissue-type Plasminogen Activator for Injection，简称rhTNK-tPA）冻干粉针剂关键生产工序真空冷冻干燥工艺（以下简称“冻干工艺”）的放大生产研究，建立符合2010版《药品生产质量管理规范》（Good Manufacture Practice，简称GMP），以及生物制品上市注册要求的生产工艺，并为同类生物制品的冻干工艺放大提供示范和参考。
　　研究内容:
　　采用的材料是rhTNK-tPA原液，具体方法如下：
　　1)按照相关法规，根据原液浓度（蛋白质含量）、西林瓶容积及合适的药液冻干厚度来确定分装量。
　　2)利用共晶点测试仪测试药液的共晶点和共熔点，根据测试结果，在中试冻干曲线的基础上调整生产冻干曲线；
　　3)确认冻干机符合GMP要求并满足工艺需要；
　　4)用调整的冻干曲线进行冻干工艺的放大研究，主要从设定温度和真空度、预冻最低温度和降温速率、升华温度和升华速率等方面进行优化，生产出符合rhTNK-tPA成品放行标准的产品。工艺确定后通过至少3批生产验证来确认工艺的稳定性和可控性。
　　研究结果:
　　1)制剂组分及分装量：rhTNK-tPA为主药，药液分装量约为3.2ml，蛋白质浓度为5.33mg/ml，L-精氨酸和聚山梨酯80为冻干保护剂，磷酸为pH调节剂。
　　2)根据4批次药液共10次共晶点和共熔点的测定，确定药液的共晶点或共晶区为-8℃～-12℃，固化的稳定温度约在-18～-24℃，共熔点为-4℃。
　　3)冻干工艺摸索：通过3批缓冲液试机、5批摸索优化冻干试验，根据药液分装厚度延长预冻时间和升华时间，不断进行冻干参数调整，基本确定冻干曲线。接着通过2批试生产，各阶段制品温度稳定，冻干工艺相对稳定。
　　4)冻干工艺验证：通过5批连续工艺验证，验证结果显示冻干工艺基本稳定。5批工艺验证的冻干总用时为48～53h，其中预冻阶段用时6～8h，升华干燥阶段用时29～33.5h，解吸干燥阶段用时9.5～12.5h。
　　5)工艺再验证：用经工艺验证的冻干工艺生产国家药监局注册和GMP现场检查批共9批次，成品的所有检测项目均符合注册标准，表明在现有的生产环境和工艺条件下，能持续稳定地生产出符合质量标准的产品。
　　6)成品批次放行检定：rhTNK-tPA成品检定项目主要包括理化（外观、复溶时间、可见异物、装量差异、不溶性微粒、pH值、渗透压摩尔质量和蛋白质含量）、生化（型别鉴定、活性和纯度）及微生物和安全性评价（无菌检查、细菌内毒素和异常毒性）等方面，包括工艺验证批以及国家药监局注册和GMP现场检查批的成品均符合成品放行标准，其中水分含量为1.6～2.6％。

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第一章 绪论

1.重组蛋白药物进展

2.冻干技术在生物制药方面的应用

3.冻干粉针制剂工艺简介

4.研究目的和意义

第二章 rhTNK-tPA冻干粉针剂冻干工艺放大设计方案

1.由中试放大至生产的存在问题及分析

2.由中试放大至生产的设计方案

2.1分装量的设计方案

2.2药液的共晶点和共熔点测试的设计方案

2.3冻干机确认的设计方案

2.4冻干曲线调整优化的设计方案

第三章rhTNK-tPA冻干粉针剂冻干工艺放大实施结果

1.分装量确认结果

2.药液的共晶点和共熔点测试结果

2.1共晶点和共熔点测试结果汇总

2.2测试截图及分析

3. 冻干机确认项目和结果

3.1安装确认

3.2运行和性能确认

4.根据所调整的冻干曲线，开展冻干试验摸索优化确认

4.1冻干曲线摸索优化结果

4.2冻干工艺验证

4.3中试冻干工艺和生产冻干工艺可比性研究

5. rhTNK-tPA产品工艺验证

5.1工艺验证目的

5.2工艺验证项目

5.3工艺验证过程监控

5.4工艺验证检测结果

5.5工艺验证结论

第四章 结论

1.总结

2.展望和讨论

参考文献

致谢