反应性氮代谢物及其清除剂对NK细胞抗K562细胞作用的影响

摘要

目的：探讨外源性、内源性反应性氮代谢产物(RNM)对NK细胞抗K562细胞活性的影响；硫普罗宁、还原型谷胱甘肽和二氢氯组胺清除外源性、内源性RNM、保护NK细胞的作用。 方法：1.在NK+K562(E/T=10/1)细胞培养体系中，先后加入外源性ONOO-及其清除剂硫普罗宁、还原型谷胱甘肽和二氢氯组胺，分别观察RNM、K562细胞抑制率、TNF-β、IFN-γ的产量及6小时、24小时NK活细胞百分率变化。2.采用IL-2及PHA为激活剂，加入MO+NK+K562(E/T=10/1，E/MO=10/2)细胞培养体系中，产生内源性RNM，观察不同浓度的硫普罗宁、还原型谷胱甘肽和二氢氯组胺组对RNM的清除作用及K562细胞抑制率、TNF-β、IFN-γ的变化。 结果：1.在NK+K562(E/T=10/1)细胞培养体系中，加入外源性ONOO-后，K562活细胞数量和NK细胞活性显著降低；而在NK+K562+ONOO-(E/T=10/1)组中加入硫普罗宁、还原型谷胱甘肽RNM，分别从260.30±9.51umom/L降低到178.65±10.00 umom/L、185.02±8.166umom/L、二氢氯组胺组无清除作用；NK活细胞百分比分别从79.87±1.021％上升到91.133±0.67％、88.03±1.46％、82.6±0.76％；K652细胞抑制率(KIR)从43.84±0.178％上升到59.35±1.078％、56.64±0.827％、51.41±1.47％；同样TNF-β、IFN-γ产量和较对照组升高。在清除外源性RNM、保护NK细胞、提高NK细胞抗K562细胞活性方面，硫普罗宁与还原型谷胱甘肽作用相似(P>0.05)，但均显著优于二氢氯组胺(P<0.01)2.在IL-2/PHA+NK+MO+K562混合培养体系中，加入不同浓度硫普罗宁、还原型谷胱甘肽和二氢氯组胺后，三种药物在清除内源性RNM方面保护NK细胞方面与清除外源性RNM作用相似，TIP组、GSH组随着各药物浓度的增加，RNM、ROM产量逐渐减少，而TNF-β、IFN-γ产量和KIR则逐渐升高；DHT不能清除RNM。 结论：外源性ONOO-对NK、K562细胞有毒性，可使NK细胞的抗瘤(抗K562)活性下降；MO呼吸爆发产生的RNM、ROM可使NK细胞的抗瘤(抗K562)活性下降。硫普罗宁、还原型谷胱甘肽均可通过清除ROM、RNM保护NK细胞，提高NK细胞抗瘤活性，且对ROM、RNM的清除表现出一定的量效关系。在清除ROM、RNM及提高NK细胞对K562细胞的抑制率方面，硫普罗宁、还原型谷胱甘肽效应相当，但均优于二氢氯组胺，且毒副作用较低，有望成为新的免疫佐剂用于白血病的过继性免疫治疗中。

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引言

一、材料与方法

二、实验流程

三、结果

四、讨论

结论

参考文献

致谢

一氧化氮与肿瘤的多重关系