反应性氮代谢物及其清除剂影响NK细胞抗K562细胞效应的实验研究

摘要

[目的]： 探讨反应性氮代谢物(RNM)对NK细胞抗K562细胞活性的影响及硫普罗宁和还原型谷胱苷肽逆转ROM、RNM抑制NK细胞抗K562细胞活性的免疫佐剂作用。 【方法】： 1.在NK细胞、K562细胞培养体系中，加入外源性ONOO-，观察RNM和ROM产量、NK细胞活性变化； 2.采用IL-2及PHA为激活剂，使RNM、ROM产量增多，观察KIR和NK细胞活性的相应变化，然后在MO+NK+K562(E/T=10/1，E/MO=10/2)细胞培养体系中加入不同浓度的硫普罗宁、还原型谷胱苷肽和二氢氯组胺，定期检测RNM、ROM产量、KIR及IL-6、TNF-β、IFN-γ的产量。 【结果]： 1.在NK细胞、K562细胞培养体系中，加入外源性ONOO-后，K562细胞数量和NK细胞活性显著降低，而RNM、ROM产量增加。 2 ①在MO培养体系中，随着MO数量的增加，RNM、ROM产量有所上升；而经IL-2/PHA激活后，在MO=10组，RNM从81.8898±0.7874umom/l升至91.0308±0.8956umom/l，ROM从193.1685±9.6505U/ml升至356.4275±5.9642U/ml(P<0.05)。 ②在NK+K562混合培养体系中，加入IL-2/PHA后，当E/T=10/1时，RNM略有增加，而ROM从58.6326±2:2.5141U/ml增加到141.915±8.2593U/ml(P<0.05)，KIR从79.98％升至93.29％(P<0.05)；当按E/MO=10/2、10/5、10/10三种比例加入MO后，RNM、ROM产量随着MO数量的增加而增加，而IL-6、TNF-β、IFN-γ,的产量和KIR则相反。对K562细胞数量作偏相关分析，RNM与KIR的负相关系数大于ROM(分别为r=-0.8511，-0.7141)。 ③在IL-2/PHA+NK+MO+K562混合培养体系中，加入TIP、GSH、DHT后，RNM产量从73.7390±3.7908umom/1分别降至64.55164±2.t570umom/l、63.0222±2.3090umom/l、73.1052±1.4528umom/l，ROM产量从321.5488±10.5030U/ml分别降至55.1665±7.0950U/ml、54.6136±5.9515U/ml、108.6608±6.2110U/ml，而KIR则从65.78％分别上升至84.47％、84.77％、79.56％。随着各药物浓度的增加，RNM、ROM产量逐渐减少，而IL-6、TNF-β、IFN-γ产量和KIR则逐渐升高，KIR与RNM、ROM产量呈明显负相关(P<0.01)。在清除RNM、ROM，提高NK细胞抗K562细胞活性方面，硫普罗宁与还原型谷胱苷肽作用相似(P>0.05)，但均优于二氢氯组胺(P<0.05)。 【结论】 1：外源性ONOO对NK、K562细胞有毒性，并可转化及诱导细胞产生：ROM。 2.MO是ROM、RNM的最主要来源，而K562细胞、NK细胞也产生少量的ROM、RNM。 3.RNM、ROM均可使NK细胞的抗瘤(抗K562)活性下降。 4.硫普罗宁、还原型谷胱苷肽均可通过清除ROM、RNM保护NK细胞，提高NK细胞抗瘤活性，且对ROM、RNM的清除表现出一定的量效关系，但二氢氯组胺不能清除RNM。 5.在清除ROM、RNM及提高NK细胞对K562细胞的抑制率方面，硫普罗宁、还原型谷胱苷肽效应相当，但均优于二氢氯组胺，且毒副作用较低，有望成为新的免疫佐剂用于白血病的过继性免疫治疗中。

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引言

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

结论及研究的不足之处

参考文献

致谢

反应性氮代谢物在白血病中的多重作用