高效液相色谱和血细胞分析技术在地中海贫血及异常血红蛋白病中的应用价值

摘要

目的： 评价高效液相色谱技术(HPLC)和血细胞分析技术在不同类型地中海贫血筛查、罕见型地贫和异常血红蛋白病检测中的临床应用价值，比较不同筛查方案的优劣性，为提高地中海贫血及相关血红蛋白病诊断的敏感性和特异性提供依据。 方法： 1.选择2013年1月至2014年12月于福建省妇幼保健院遗传咨询门诊和产科门诊就诊的患者1782例，年龄1～48岁； 2.采集静脉血标本，在规定时间内分别用血细胞分析技术测定平均红细胞容积（MCV）和平均红细胞血红蛋白量（MCH），用高效液相色谱技术（HPLC）测定HbA2值。同时采用PCR和反向点杂交(RDB)方法检测地中海贫血基因常见位点缺失或突变类型，依据基因检测结果，将受检人群初步分为α地贫、β地贫、αβ复合型地贫和对照组； 3.对高效液相色谱分析提示地中海贫血而常规地贫基因检测正常的标本进行罕见型地中海贫血基因测序，并对高效液相色谱峰型图谱提示异常血红蛋白病的血样进行基因测序来进一步确诊； 4.采用SPSS17.0统计学软件进行数据分析，比较不同筛查方案的优劣性。 结果： 1.平均红细胞容积(MCV)用于检测α地贫、β地贫和αβ复合型地贫的灵敏度分别为87.8%，98.5%和100%，MCV用于检测地中海贫血的特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断准确度分别为65.2%，67.3%，90.8%和76.8%；平均红细胞血红蛋白量(MCH)用于检测α地贫、β地贫和αβ复合型地贫的灵敏度分别为93.5%，98.9%和92.3%，MCH用于检测地中海贫血的特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断准确度分别为54.8%，62.3%，93.7%和72.6%；血红蛋白A2(HbA2)用于检测α地贫、β地贫和αβ复合型地贫的灵敏度分别为28.1%，96.6%和100%，HbA2用于检测地中海贫血的特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断准确度分别为77.6%，64.6%，67.4%，66.4%。MCH用于地贫筛查的灵敏度优于MCV（95.3%vs91.6%，P<0.01），MCV则优于HbA2（91.6% vs52.2%，P<0.01）；而HbA2用于地贫筛查的特异度优于MCV（77.6% vs65.2%，P<0.01），MCV则优于MCH（65.2% vs54.8%，P<0.01）。 2. MCV+MCH筛查方案用于α地贫、β地贫的灵敏度分别为87.4%，97.7%、用于地贫的特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断准确度分别为66.4%、67.9%、90.3%和77.2%；MCV+MCH+HbA2联合检测α地贫、β地贫的灵敏度分别为26.8%和95.0%，用于地贫的特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断准确度分别为84.3%、71.7%、68.6%和69.5%。MCV+MCH联合筛查α地贫的灵敏度显著高于MCV+MCH+HbA2联合筛查（87.4% vs26.8%，P<0.001）,而对β地贫筛查的灵敏度无显著差异（97.7%vs95.0%，P>0.05）；MCV+MCH+HbA2联合检测地贫的特异度显著高于MCV+MCH(84.3% vs66.4%，P<0.001)。 3.MCV+MCH+HbA2联合筛查用于β地贫组的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断准确度(分别为95.0%，99.3%，97.3%，98.7%和98.4%)显著高于α地贫组（分别为26.8%，85.0%，47.6%，69.5%和65.4%）。 4. HbA2单项指标筛查对β地贫的灵敏度、特异度分别为96.6%和99.5%，而对α地贫的灵敏度和特异度分别为28.1%和78.1%，存在着较高的漏诊率，漏诊的α地贫基因型以--SEA/αα为首（占所有漏诊α地贫的69.9%），-α3.7/αα次之（占19.5%）。 5.首次发现1例β地贫基因新突变类型（其MCV、MCH和HbA2检测值分别为72fl，25pg，4.9%，常规地贫基因检测未见异常），经基因测序确诊为codon36(-C)β地贫新突变类型； 6.2例福建首报β地贫基因突变类型，常规地贫基因检测未见异常，例1 MCV、MCH和HbA2检测值分别为68fl、23pg和5.4%，经基因测序确诊为codon30(A→G)β地贫；例2 MCV、MCH和HbA2检测值分别为71fl、21pg和5.2%，经基因测序确诊为上游调控区+22(G→A)β地贫。 7.发现3例罕见型α地贫，其中2例泰国突变型α地贫的MCV、MCH、HbA2检测值分别为78fl、26pg、2.2%和76fl、25pg、2.2%；1例香港突变型α地贫的MCV、MCH、HbA2检测值分别为75fl，22pg，2.4%。 8.分析HPLC的峰型图谱诊断异常血红蛋白病7例，包括2例HbJ-Bangkok、2例HbE、1例镰型红细胞贫血、1例HbD、1例Hb Abruzzo。其中HbE由常规地贫基因检测确诊，表现为β地贫codon26基因突变；其余样本常规基因检测结果阴性，均由基因序列测定确诊。 结论： 1．在各种不同的筛查方案中，MCV+MCH用于地中海贫血初筛的效果最好； 2．MCV+MCH+HbA2联合筛查用于β地中海贫血的诊断价值最优； 3．HPLC适合于地中海贫血的筛查，对β地贫的筛查效果明显好于α地贫，而对α地贫存在较高的漏诊率； 4．HPLC对发现罕见型地贫和异常血红蛋白病的诊断有一定的实用价值。

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前言

对象与方法

1 研究对象

2 实验所需仪器及试剂

3 实验方法

4 病例分组及判断标准

5 统计学分析

结果

1 MCV、MCH和HbA2单项指标分别用于地贫筛查的价值

2 MCV+MCH与MCV+MCH+HbA2两种联合筛查方案之间的比较

3 MCV+MCH+HbA2联合筛查分别运用于α、β地贫组的比较

4 HbA2值在α、β以及αβ复合型地贫应用价值的比较

5 罕见型地贫

6 异常血红蛋白病

讨论

结论

参考文献

综述:地中海贫血筛查与诊断的现状及展望

在学期间已发表的论文：

致谢