琯溪蜜柚单染色体AFLP指纹图谱构建和分类

摘要

柚(Citrusgrandis(L.)Osbeck)是柑橘属真正柑橘类植物,是我国的特色果树。由于具有生长周期长和遗传背景较复杂等特点,致使柚的精确物理图谱一直难以构建,这对其在基因组学、分子生物学等方面的深入研究造成了困难。
　　 本试验采用单染色体微分离与微克隆技术,建立了48条柚单染色体文库;通过构建AFLP指纹图谱,利用Ntsys软件进行分析,完成对柚单染色体较为系统的分类。
　　 主要试验结果如下:1、摸索出适合柚的基因组DNA提取方法,获得质量好、纯度高的柚基因组DNA;采用玻璃针微分离法,分离得到48条单染色体。2、经两轮LA-PCR对柚单染色体进行体外扩增,建立了48条柚单染色体文库;从23对引物组合中筛选出较为理想的3对,进行单染色体的AFLP选择性扩增。
　　 3、采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及银染方法,获得具有大量多态性片段的单染色体AFLP指纹图谱。
　　 4、通过Ntsys软件分析AFLP指纹图谱,将48条柚单染色体分为13类。
　　 本试验通过构建的AFLP指纹图谱,从分子水平上对柚单染色体进行了科学分类,同时提供了大量多态性候选片段用于筛选各条单染色体的特异分子标记。这为今后绘制精确的柚物理图谱奠定了基础,对进一步开展柚分子遗传学和基因组学研究具有重要的理论和现实意义。