水产品中致病性副溶血性弧菌的检测

摘要

副溶血性弧菌是食物中毒的重要病原菌。环境中95％的副溶血性弧菌为非致病菌，5％为致病菌。判断水产品的食用合格性需要准确鉴定5％的致病菌。神奈川溶血反应曾作为致病性判定的标准，但该试验操作繁琐，易产生假阳性。耐热性溶血毒素作为副溶血性弧菌致病性的主要毒力因子，可由tdh基因的检出来判断菌株的致病性。该方法尚未在国内进行应用。本研究建立了一个以16SrDNA序列分析鉴定副溶血性弧菌，以tdh基因测定的PCR和实时荧光定量PCR反应体系定量反映副溶血性弧菌致病性的方法，并与神奈川溶血反应，脲酶反应进行比较。使用16SrDNA分析临床分离的181株常见菌作为对照，对39株副溶血性弧菌进行测定；36/39株副溶血性弧菌的鉴定结果与生化培养法相符，对临床分离菌株均无误判。对97株腹泻患者来源和75株环境来源分离的副溶血性弧菌进行tdh基因测定，神奈川溶血反应和脲酶反应。腹泻患者和环境来源菌株的tdh基因检出率有显著差异（83.51％vs13.70％，P<0.001）。神奈川溶血反应和脲酶反应的区分能力低于tdh基因检测。建立了一个实时荧光定量PCR反应以测定tdh基因拷贝水平，定量公式为y=-3.144logx+43.229（R=0.997，P<0.001）。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

前言

1实验材料和方法

1.1材料

1.2方法

2实验结果

2.1副溶血性弧菌的培养及计数

2.2使用16S Rdna部分序列鉴定副溶血性弧菌

2.3致病性副溶血性弧菌tdh基因检测

2.4实时荧光定量PCR反应结果

2.5神奈川溶血试验，脲酶反应和tdh基因鉴定致病性副溶血性弧菌的能力比较

3讨论

3.1使用16S Rdna部分序列鉴定副溶血性弧菌

3.2副溶血性弧菌致病性标志基因tdh的实时荧光定量聚合酶链式反应的建立

3.3 tdh基因检测区分致病性和非致病性副溶血性弧菌的价值

全文总结

文献综述：副溶血性弧菌毒性因子鉴别的研究

参考文献

致 谢

硕士研究生期间发表的学术论文