死亡受体结构域蛋白DAXX在卵巢表面上皮细胞和卵巢癌细胞中作用研究

摘要

卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤，其致死率在所有妇科癌症中居于第五位。成年女性的卵巢表面覆盖有一层扁平的卵巢上皮细胞(mouseovarian surface epithelium，mOSE)。卵巢表面上皮细胞具有分泌激素和运输等功能。在排卵的过程中，女性卵巢表面出现周期性的破裂，mOSE细胞通过自我的复制可以修复这种周期性的损伤，在这个过程中mOSE细胞基因组的完整就显得尤为重要。有研究表明，在羊排卵时，卵巢破裂处的mOSE细胞会发生DNA损伤。除此之外，化学试剂methoxychlor也可以导致mOSE细胞氧压力增强和DNA损伤。Valko等人也报道在大多数肿瘤中都有DNA损伤发生，这说明早期基因组异常与恶性肿瘤的发生密切相关。
　　卵巢癌治疗以化疗为主，临床上常用的卵巢癌化疗药物大多数可以造成肿瘤细胞的DNA损伤，如顺铂、博来霉素、VP-16和阿霉素，从而导致肿瘤细胞的凋亡。卵巢癌患者对化疗药物的耐药性是卵巢癌治疗的关键问题。原癌蛋白的异常表达（如FAS，caspases，和p53等）及凋亡相关蛋白的失活(如AKT，FLIP)都可以引起肿瘤细胞的耐药。
　　DAXX作为原癌蛋白与死亡域相关蛋白CD95受体相结合。通过激活c-Jun NH2-末端激酶增强CD95介导的生长因子β依赖性凋亡。有文献报道，RNA干扰沉默Daxx可增加细胞凋亡，并且在小鼠中敲除Daxx基因可导致小鼠胚胎致死。这些都说明DAXX具有抗凋亡的作用。除了在凋亡和抗凋亡中的作用外，DAXX还可以与多种蛋白结合发挥转录沉默作用，如组蛋白去乙酰化酶HDAC1，HDAC2，DNA甲基化酶DNMT1，同时DAXX也可作为转录抑制因子抑制C/EBPβ，c-Met, Pax3，Ets(l)，p53， p73， p63，糖皮质激素受体，雄激素受体和SMAD4的表达。
　　DAXX的转录调控功能与它的核定位密切相关。DAXX与SUMO修饰的PML结合并共定位在亚细胞核结构，即PML癌基因结构域PODs。早幼粒细胞白血病蛋白PML核体结构(PML-NBs)存在于所有的哺乳细胞中，是细胞核内较大的核结构域。PML与细胞凋亡、转录调控和肿瘤抑制都有密切联系。有研究表明一些凋亡的调控因子定位在PML-NBs区域，在PML缺失的老鼠中出现凋亡异常的现象。DAXX和PML在卵巢表面上皮细胞和卵巢癌细胞中的作用至今不清楚，本研究主要解决以下几个问题:
　　第一部分，我们成功的构建了过表达Daxx和敲除Daxx的mOSE细胞系，我们发现Daxx敲除可增加mOSE细胞依赖p53/p21途径发生衰老，同时和PML共同参与mOSE细胞DNA损伤。
　　第二部分，我们发现DAXX在人卵巢上皮细胞癌中高表达，但是在人颗粒细胞癌中低表达。在体外培养的卵巢癌细胞中，DAXX和PML相互作用共定位于PML-NBs区域。我们对DAXX在卵巢癌细胞中增殖、迁移及化疗抵抗进行研究。在卵巢癌细胞中过表达Daxx可以促进细胞增殖、克隆形成和转移，而通过RNA干扰使Daxx缺失后可以抑制卵巢癌细胞的增殖、克隆形成和转移能力。裸鼠的体内实验表明，给裸鼠注射Daxx过表达的卵巢癌细胞可以增强肿瘤形成能力，而RNA干扰Daxx后抑制肿瘤形成。更为重要的是，Daxx过表达可以诱导正常mOSE细胞恶性转化，DAXX通过结合PML阻止X-RAY和化疗药物诱导的卵巢癌细胞发生DNA损伤。综上所述，这些结果表明DAXX可以促进卵巢癌细胞增殖和阻止卵巢癌细胞发生DNA损伤，是一个新的卵巢癌基因。因此，在临床上可以将DAXX和PML核体作为卵巢癌治疗的分子靶标。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

第一部分 DAXX在人卵巢表面上皮细胞中作用的研究

前言

第一节 DAXX缺失促进卵巢表面上皮细胞发生p53依赖的衰老

1 材料

2 实验方法

3 实验结果

第二节 Daxx缺失诱导卵巢表面上皮细胞发生DNA损伤

1．材料

2．方法

3．结果

4 讨论

参考文献

第二部分 DAXX在卵巢癌细胞中作用研究

前言

第一节 DAXX促进卵巢癌细胞增殖、转移和克隆形成

1．材料

2．方法

3．结果

第二节 体内研究DAXX在卵巢癌中的作用

1．材料

2．方法

3．结果

第三节 DAXX和PML相互作用阻止卵巢癌细胞发生DNA损伤

1．材料

2．方法

3．结果

4．讨论

参考文献

文献综述

致谢

博士期间发表论文及主持的科研课题