他汀类药物调脂效果与CETP基因启动子区常见单核苷酸多态的相关性研究

摘要

[目的]
　　 本课题采用包括收集经临床确诊的粤西地区汉族人群体高脂血症患者外周血标本、生物信息学方法搜寻胆固醇酯转运蛋白(cholesteryl ester transfer protein，CETP)基因启动子区常见单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms，SNPs)、PCR扩增ShiPs所在DNA片段、限制性内切酶谱检测SNPs、SPSS软件统计学分析检测数据等方法，筛查CETP基因内与粤西地区汉族人群体他汀类药物调脂效果相关的功能性SNPs，为临床上制定合理用药方案提供重要的科学依据。
　　 [方法]
　　 1.收集经临床生化检查确诊的粤西地区汉族人群体高脂血症患者外周血标本207例(TC≥5.69 mmol/L或LDL-C≥3.64 mmol/L)，5ml/例。收集上述病例调脂治疗前的全套血脂检测结果以及其他有关临床资料和他汀类药物调脂治疗4周后(辛伐他汀，20mg/day)的全套血脂检测结果。
　　 2.搜索NCBI数据库SNP database中CETP基因启动子区4个SNPs(-69G/A、-629C/A、-971G/A、-1337C/T)的DNA序列资料。
　　 3.设计合成4对SNPs的PCR扩增引物。
　　 4.PCR扩增CETP基因中包含这4个SNPs的DNA片段。
　　 5.限制性内切酶谱检测PCR扩增片段中的SNPs，计算基因频率和基因型频率。
　　 6.SPSS统计学软件分析各SNP与各血脂指标的相关性，筛查粤西汉族人群体CETP基因中与他汀类药物调脂效果相关的SNPs。
　　 [结果]
　　 1.在所研究的四种多态中-69G/A多态未检出，表明该SNP在粤西地区汉族人群中非常罕见。
　　 2.在本研究结果中，-629A等位基因频率在粤西地区汉族人群体中的分布与欧洲白种人相似(P=0.977)，而-971A和-1337T两个等位基因的频率则显著低于白种人(P=0.000；P=0.000)。
　　 3.调整年龄、性别、吸烟、体质量系数等混杂因素的影响作用后，-629AA基因型个体的TC基线水平比CC基因型个体高出0.558mmol/L(P=0.034)。而较高TC水平被认为是致动脉粥样硬化的主要危险因素之一，提示AA基因型个体发生心血管疾病的危险性可能高于其他两种基因型的个体。
　　 4.辛伐他汀治疗4周后TC和LDL-C水平的改变在-629C/A多态各基因型组间均有显著性差异(F=4.169，P=0.017；F=9.754，P=0.000)，两者下降的幅度在-629CC、CA和AA基因型组间都呈逐渐增大趋势。-629AA基因型个体的TC水平下降幅度较CC基因型个体要明显高0.515mmol/L(P=0.013)，-629AA和CA基因型个体中的LDL-C水平下降幅度比CC基因型个体分别高出0.599mmol/L和0.382mmol/L(P=0.000，P=0.005)，调整混杂因素后该差异仍然存在(F=3.767，P=0.025；F=8.533，P=0.000)。
　　 5.调整年龄、性别、吸烟、体质量系数等混杂因素影响后，-1337C/T多态与治疗后的HDL-C水平的改变呈相关性(F=3.064，P=0.049)，HDL-C水平升高的幅度在-1337TT、TC和CC基因型组间有逐渐增大的趋势。
　　 6.辛伐他汀治疗4周后血脂水平的改变在-971G/A多态3种基因型个体中差异不明显，提示-971G/A多态同辛伐他汀调脂效果并无关联。
　　 [结论]
　　 1.CETP基因-69G/A多态在粤西地区汉族人群中非常罕见。
　　 2.CETP基因-971G/A多态同辛伐他汀调脂效果在本研究结果中无明显相关性。
　　 3.CETP基因-629C/A和-1337C/T多态可能是粤西地区高脂血症患者他汀类药物调脂效果个体化差异的重要影响因素之一。