异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡的影响实验研究

摘要

目的:
　　1.通过观察异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞增殖的影响，阐明异鼠李素是否对人肝癌HepG-2细胞有抑制作用.
　　2.通过观察异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞的细胞增殖，细胞周期和凋亡以及相关凋亡基因Caspase-3表达的影响，为进一步阐明异鼠李素的抑癌作用提供理论依据。
　　方法:
　　以加PBS组为空白对照组，以药物终浓度为0mg/L的细胞组为阴性对照组、以药物终浓度为20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L和100 mg/L为实验组，分别处理HepG-2细胞24h，48h和72h后，噻唑蓝(MTT)比色观察各组药物对细胞的毒性作用，流式细胞术测异鼠李素(20mg/L、40mg/L、60mg/L)对人肝癌HepG-2细胞周期及凋亡的影响，qRT-PCR检测异鼠李素(20mg/L、40mg/L、60mg/L)对人肝癌HepG-2细胞Caspase-3基因的表达水平的影响。
　　结果:
　　1.噻唑蓝(MTT)比色法检测药物终浓度分别为0mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L和100mg/L的培养基分别处理人肝癌HepG-2细胞24h，48h和72h后，结果显示异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞的增殖有剂量—效应关系，随浓度的升高，抑制率增高，抑制效果增强，但无明显时间依赖性(P＞0.05)，且60mg/L组、80mg/L组和100mg/L组OD值两两比较无统计学意义（P＞0.05）。
　　2.流式细胞仪法检测结果显示异鼠李素作用后可使人肝癌HepG-2细胞发生凋亡，直方图上显示典型的细胞凋亡峰，凋亡率分别为1.725％、10.143％、12.345％和19.383％;异鼠李素在20mg/L、40mg/L、60mg/L浓度时G0-G1期细胞数量明显高于对照组，S期细胞明显少于对照组，并呈浓度依赖关系，实验组和对照组两两比较均有统计学意义(P＜0.05)。
　　3.qRT-PCR结果显示随药物浓度的增大，Caspase-3基因表达量逐渐增加，且实验组和对照两两比较有统计学意义(P＜0.05)，说明异鼠李素可能通过上调Caspase-3基因表达诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡。
　　结论:
　　1.异鼠李素对人肝癌细胞的增殖有明显地抑制作用，并随着作用浓度的增大，抑制作用逐渐增强。
　　2.流式细胞仪检测可见亚二倍体峰;提示异鼠李素有诱导人肝癌细胞凋亡作用。异鼠李素可通过诱导人肝癌细胞凋亡并将细胞阻滞在G0-G1期，使细胞不能进入S期进行DNA合成，最终使瘤细胞的体外增殖受到抑制。
　　3.qRT-PCR结果显示随药物浓度的增大，Caspase-3基因表达量逐渐增多，说明异鼠李素可能通过上调Caspase-3基因表达对人肝癌细胞发挥作用。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的和内容

2 材料和方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

2．3 统计学处理

3 结果

4 讨论

5 总结

参考文献

综述 Caspases家族在肿瘤细胞凋亡的作用及进展

致谢

附录