香叶木素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞的机制研究

摘要

目的： 香叶木素被发现存在于橘子和柠檬的果皮、金合欢及橄榄植物中，其主要活性成分为黄酮类化合物，除具有黄酮类化合物的抗菌、抗炎、抗突变、抗氧化、抗变应等一般特性外，还具有调节信号转导通路抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞周期阻滞，促进细胞凋亡、逆转肿瘤耐药性及增加肿瘤对化疗的敏感性。本实验通过香叶木素作用肝癌细胞HepG2细胞后对细胞周期、细胞凋亡的影响及探明诱导细胞CHK1/CHK2通路对G2/M期阻滞的机制。 方法： 1. MTT法检测香叶木素对肝癌细胞增殖活力的影响及倒置相差显微镜观察肝癌HepG2细胞的形态学。 2. Western bloting检测香叶木素作用肝癌细胞后对细胞周期蛋白的表达及凋亡蛋白的表达； 3.流式细胞术检测香叶木素作用肝癌细胞后对细胞周期的影响； 4.用香叶木素作用经Chk1SiRNA、 Chk2SiRNA干扰后的HepG2细胞，用流式细胞术检测干扰后肝癌细胞的细胞周期的变化 5. Western bloting法检测肝癌细胞经Chk1SiRNA、Chk2SiRNA干扰后细胞周期蛋白的表达 结果： 1.香叶木素抑制细胞增殖和细胞形态学变化，结果表明：香叶木素能够抑制HepG2细胞的增殖，且具有时间浓度依赖性。倒置显微镜观察未经处理的HepG2细胞生长良好，而经香叶木素处理的细胞在倒置相差显微镜下观察到：对照组细胞触角纤细，生长旺盛，形态规则，细胞轮廓清晰，大小均一，折光度强，贴壁良好。经香叶木素处理后的实验组可见HepG2细胞形态不规则，细胞形态变圆，核染色质聚集、出现断裂，胞质浓缩、细胞间隙增大，部分细胞呈漂浮状态或贴壁不牢，细胞碎片随浓度的增大而增多，且随药物浓度增加，细胞数明显减少。 2.香叶木素处理肝癌细胞HepG2细胞，通过Western Blotting实验可发现香叶木素可促使HepG2细胞周期蛋白及凋亡蛋白高表达，随着香叶木素药物浓度的增加随着香叶木素药物浓度的增加，Bax，Bad，cleved-capase3，P21，P53蛋白表达增高，Bcl-2，cyclinB1，cyclinA2蛋白表达下调。 3.香叶木素处理肝癌细胞HepG2细胞后，香叶木素可促使HepG2细胞凋亡，且随香叶木素药物浓度的增加，早期凋亡及晚期凋亡的细胞术逐渐增加，细胞周期结果显示导致G0/G1期细胞比例降低，G2/M期细胞细胞比例升高，且具有一定的浓度依赖性。 4.人肝癌HepG2细胞分别经Chk1SiRNA、 Chk2SiRNA成功干扰后，通过流式细胞术检测，经Chk2SiRNA干扰后的细胞G2/M期阻滞明显，而Chk1SiRNA干扰后的细胞G2/M期阻滞不明显（P>0.05）。 结论： 1.香叶木素能有效抑制人肝癌细胞HepG2细胞活力、对人正常肝细胞无明显影响。 2.香叶木素能够促使人肝癌HepG2细胞周期阻滞及细胞凋亡，且呈时间-浓度依赖性。 3.该研究通过敲低chk1SiRNA和chk2SiRNA，阻断chk1和chk2信号通路进一步验证香叶木素是通过chk2信号通路调控人肝癌HepG2细胞G2/M期的转变。

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1 前言

1.1 研究背景

1.2 细胞各周期检测点作用及功能

1.3 细胞周期调控的异常与肿瘤的发生发展

1.4 研究目的

1.5 研究内容

2材料和方法

2.1 材料

2.2 方法

3 结果

3.1 香叶木素对正常肝细胞 LO2 细胞活力无明显影响（图3.1.1A）但能抑制HepG2细胞活力（图3.1.1B）

3.2香叶木素能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖

3.3 香叶木素能明显诱导肝癌HepG2细胞G2/M期阻滞及诱导凋亡

3.4 香叶木素能下调HepG2细胞周期通路相关蛋白表达的影响

3.5 通过Chk1SiRNA和Chk2SiRNA分别对HepG2细胞进行周期通路Chk1和Chk2蛋白的干扰

4 讨论

5 全文小结及展望

5.1 全文小结

5.2展望

参考文献

综述:类黄酮药物对胆囊癌抑制作用的相关研究

附录一： 缩写词中英文对照

附录二 在读硕士期间的科研情况