自噬抑制剂氯喹通过抑制香叶酰香叶酰基转移Ⅰ的表达诱导人气道平滑肌细胞凋亡

摘要

气道平滑肌在支气管哮喘的气道重塑和气道气道高反应起关键的作用,通过气道热成形术去除气道平滑肌细胞可有效地控制哮喘发作.如何用药物来诱导气道平滑肌细胞凋亡以逆转气道重塑减轻气道高反应是目前哮喘研究的热点之一.香叶酰香叶酰基转移Ⅰ(geranylgeranyl transferase Ⅰ,GGTⅠ)是参与真核细胞内信号蛋白转录后修饰必须的一种酶,具有调节气道平滑肌细胞自噬和凋亡的作用.氯喹是一种自噬抑制剂,已应用于诱导抗药肿瘤细胞的凋亡,推测氯喹可通过抑制GGTⅠ的表达而诱导人气道平滑肌细胞凋亡.本实验中采用人气道平滑肌细胞爬片,培养液中加入不同浓度的氯喹(0、50、100、150和200 μM)孵育24 h,并用100 μM氯喹分别孵育0、12、24、48和72 h,TUNEL法检测人气道平滑肌细胞凋亡情况,观察氯喹诱导人气道平滑肌的凋亡效果.免疫印迹检测氯喹100μM分别孵育0,12,24,48和72 h的平滑肌细胞中p62蛋白和p53蛋白表达水平。RT-PCR检测氯喹100μM孵育24h和空白对照的人气道平滑肌细胞中GGTⅠ mRNA水平。结果表明，氯哇在体外具有诱导人气道平滑肌细胞凋亡的作用，且具有时间依赖性和剂量依赖性的特点，氯喹100μM孵育人气道平滑肌p62蛋白和p53蛋白的表达水平随时间延长逐渐升高，氯喹抑制人气道平滑肌细胞的GGTⅠ表达。结论:本研究证明，自噬抑制剂氯喹通过抑制GGTⅠ的表达激活p53凋亡通路而诱导人气道平滑肌细胞的凋亡。氯喹类药物在慢性气道炎症引起的气道重塑方面的治疗价值值得进一步研究。