类细菌素产生菌筛选及类细菌素粗品对冷却猪肉防腐效果的研究

摘要

本研究从湛江海域8种鱼的肠道和腮中分离共附生微生物，利用牛津杯法从中筛选抗菌活性菌株，并对高活性、抗菌谱广的菌株进行分子生物学鉴定及系统发育分析。通过对抑菌物质酸排除、过氧化氢物排除实验，以及蛋白酶敏感实验筛选类细菌素产生菌，并进行多相分类鉴定。对类细菌素产生菌的生物学特性及类细菌素的特性进行研究，同时对该类细菌素粗品进行冷却肉防腐保鲜效果的研究。主要研究结果如下：
　　(1)共分离到的277株共附生微生物，其中63株菌显示了抗菌活性，占总菌数的22.7％；22株典型活性菌株分子生物学鉴定及系统发育分析表明：6株是Baclliusspp.，比例最高；2株是 Psuedomnoas spp.；3株是Lactobacillus spp.；2株是 Psychrobacterspp.；剩下9株分别为Pseudoalteromonas sp.、MicTococcus sp、.Rothia sp.、Citrobactersp、Cobetia sp.、Paracoccus sp.、Staphylococcus sp.、Brevibacterium sp.以及Brachybacterium sp.，其中ZJHD2-58、ZJHD5-23及ZJHD2-31这3株菌可能是潜在的微生物新物种。
　　(2)菌株ZJHD3-06发酵液抑菌作用在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后，对单核增生李斯特菌的抑制作用基本不变，但分别经过胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K及木瓜蛋白酶处理后，蛋白酶解发酵液对单核增生李斯特菌的抑制作用比未经蛋白酶处理的均有明显的下降，甚至消失，表明该菌株产生具有抑菌活性的蛋白或多肽类物质，属于类细菌素。
　　(3)菌株ZJHD3-06经多相分类鉴定，确定该菌为解淀粉芽胞杆菌Bacillusamyloliquefaciens。
　　(4)对菌株ZJHD3-06类细菌素粗品的生物学特性研究表明，菌株发酵液在硫酸铵饱和度为60％时析出抗菌蛋白或多肽最多；其类细菌素粗品具有相当好的热稳定性，在80℃处理15min活性仅下降了2.20％；pH对抗菌活性物质影响显著，但 pH为6.0左右时活性不受影响，pH过小或过大均对抗菌活性物质影响较大；对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及真菌均具有抑菌作用，抑菌谱广。
　　(5)对菌株ZJHD3-06类细菌素粗品保鲜应用的初步研究结果表明，菌株ZJHD3-06类细菌素粗品对冷却猪肉具有明显的保鲜作用，且效果要优于Nisin，可使冷却猪肉的保质期延长6-9d；对冷却肉中潜在致病菌单增李斯特菌有较好的抑制效果，可在短期内防止冷却肉的腐败变质，提高冷却肉的货架期，作为冷却肉的生物防腐剂，具有进一步深入研究与开发的潜力。