兔窦房结缺血-再灌注损伤及L-精氨酸的干预作用

摘要

窦房结(SAN)急、慢性缺血可致其器质性病变、冲动形成和传导障碍，是心脏电生理活动异常的主要因素之一，亦是发病率较高的病窦综合征常见病因。由于窦房结体积小，功能单位少，细胞连接简单，血供丰富且多为单支血管供血，故极易受供血侧冠状动脉病变的影响。一旦结实质病变后，易致其机能障碍，恢复较困难。目前，有关普通心肌缺血-再灌注的研究十分广泛。一些高效、高选择性且不易产生耐药性的一氧化氮载体类药物已在临床上用于防治多种心血管疾病。而对心脏传导系统缺血-再灌注损伤与保护的认识远远不够。因此，研究窦房结缺血-再灌注结构和功能的变化及发生机理，并探讨内、外源性因素对缺血-再灌注窦房结细胞的保护、修复机制具有重要的基础理论和临床应用意义。 本文在窦房结在体器官水平和分离培养单细胞水平上，仅从组织形态学和电生理功能角度设计如下几个方面的研究内容： 第一部分在体兔窦房结缺血再灌注损伤及L-精氨酸的干预 第一章兔在体窦房结缺血再灌注损伤动物模型建立 目的：以手术方式建立可靠的在体窦房结缺血再灌注动物模型。 结论：此模型建立的关键是从胸骨正中开胸、右冠状动脉根部结扎，结合心电图加以确认，方法可靠，成功率高。 第二章兔右冠状动脉缺血再灌注致心律失常的演变及L-精氨酸干预作用 目的：观察右冠状动脉缺血再灌注致心律失常的演变及L-Arg干预效果。 结论：补充适量的L-Arg具有抗心律失常作用；缺血期时间越长，L-Arg抗再灌注心律失常作用越差。 第三章L-精氨酸对兔右冠状动脉缺血再灌注时窦房结功能的影响 目的：观察L-精氨酸对兔右冠状动脉缺血再灌注窦房结传导时间(SACT)和恢复时间(SNRT)的影响。 结论：随着缺血时间延长SAN功能损伤加重；早期再灌注损伤敏感；组织内适当补充L-Arg，于缺血期和再灌早期对SAN电生理功能恢复是有益的，于再灌注后期可能加重损伤。 第四章缺血再灌注窦房结细胞凋亡及相关基因bcl-2、bax和iNOS蛋白表达及L-精氨酸干预 目的：探讨缺血再灌注窦房结细胞凋亡与其相关基因bcl-2、bax以及iNOS蛋白表达之间的关系，并评价L-Arg干预作用。 结论：①iNOS生成增多可能与缺血再灌注窦房结细胞凋亡密切相关；②补充适量L-Arg能减少细胞凋亡，可能与bcl-2表达上调和bax表达下调有关。 第五章缺血再灌注窦房结间质胶原网络的改建 目的：观察缺血-再灌注窦房结胶原网架重构与改建的形态学改变。 结论：窦房结缺血再灌注致其间质胶原网络重构，必然影响到其冲动的产生和传递，可能是病窦综合征发病原因之一。 第二部分离体兔窦房结模拟缺血再灌注损伤及L-精氨酸的干预 第一章乳兔窦房结定位和细胞构筑的光镜观察 目的：详细观察乳兔窦房结的位置、形态大小和细胞构筑，为行窦房结的准确取材提供充分的形态学资料。 结论：①位置特殊，取材时应留足上腔静脉近端；②细胞构筑简单，起搏细胞含量高，细胞较幼稚，较适合窦房结细胞原代纯化培养。 第二章乳兔窦房结取材和纯化培养 目的：为深入研究窦房结细胞的结构特点和自律起搏的机制等提供获取充足的窦房结单细胞的实验方法。 结论：细胞体积小，含量高，搏动快的梭形细胞是起搏细胞。 第三章模拟缺血再灌注对乳兔窦房结培养细胞结构损伤及L-精氨酸的干预效果 目的：观察模拟缺血再灌注培养乳兔窦房结细胞损伤及L-精氨酸干预影响。 结论：①模拟缺血一定时间后可以诱导窦房结细胞凋亡，再灌注后细胞凋亡加重，甚至导致细胞坏死；②模拟缺血/再灌注窦房结细胞与L-精氨酸共同孵育，可减轻细胞损伤。 第四章L-精氨酸对模拟缺血再灌注培养乳兔窦房结细胞损伤的保护机制 目的：检测缺血/再灌注后SAN细胞内SOD活性、MDA、NOS、NO含量变化，探讨L-Arg对窦房结细胞保护的可能机制。 结论：①再灌注后细胞损伤较单纯缺血重，可能与活性氧自由基生成较多有关；②补充NO合成底物L-精氨酸具有清除自由基功效，增加SOD活力，减少氧自由基生成、阻断氧自由基介导的细胞凋亡。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一部分在体兔窦房结缺血再灌注损伤及L-精氨酸的干预

第一章兔在体窦房结缺血再灌注损伤动物模型的建立

第二章兔右冠状动脉缺血再灌注致心律失常演变及L-精氨酸干预作用

第三章L-精氨酸对兔右冠状动脉缺血再灌注时窦房结功能干预作用

第四章缺血再灌注窦房结细胞凋亡及其相关基因iNOS蛋白表达及L-精氨酸的干预

第五章缺血再灌注窦房结间质胶原网络的改建

参考文献

第二部分离体兔窦房结细胞模拟缺血再灌注损伤及L-精氨酸干预

第一章乳兔窦房结定位及其细胞构筑的光镜观察

第二章乳兔窦房结的取材和纯化培养

第三章 L-精氨酸对模拟缺血再灌注培养乳兔窦房结细胞结构的影响及L-精氨酸干预效果

第四章L-精氨酸对模拟缺血再灌注培养乳兔窦房结细胞损伤的保护机制

参考文献

全文总结

附录 窦房结缺血性损伤及治疗进展（综述）

成果

致谢

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