鹅源副粘病毒NP、M基因RNA干扰慢病毒载体构建及鉴定

摘要

目的：构建并鉴定靶向鹅源副粘病毒NA-1株NP、M基因shRNA的慢病毒载体，以便进一步研究抗病转基因鹅的培育。方法：针对GPMV NP、M基因mRNA保守区序列，分别设计并合成3对Oligo DNA，退火形成双链DNA，与经ARe I和EcoR I双酶切后线性化的pLKD-GFP载体，连接、转化，产生pLKD-shNP1、2、3；pLKD-shM1、2、3慢病毒干扰载体，PCR筛选阳性克隆，测序鉴定。用pLKD-shNP、pLKD-shM分别与辅助质粒pCMV-dR8.2和pCMV-VSV-G共转染包装细胞293T细胞，包装产生重组慢病毒假病毒颗粒，以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果：PCR和测序证实，成功构建了慢病毒载体pLKD-shNP、pLKD-shM。包装慢病毒悬液滴度为：5×107TU/ml。结论：成功构建鹅源副粘病毒NA-1株NP、M基因shRNA的慢病毒载体，为应用慢病毒介导RNAi技术培育抗病转基因鹅奠定一定基础。