Construction of a lentiviral vector for RNA interference of human VIM gene and its silencing effect in pancreatic cancer cells

摘要

目的将为人的活力基因的 RNA 干扰(RNAi ) 构造 lentiviral 表示向量；并且在胰腺的癌症房间线 Panc-1 估计它的基因 silencing 效果。短发卡 RNA (shRNA ) 定序的三人的活力基因用联机的可得到的一个软件和一对被设计的方法来自文件。在合成以后并且退火，四双 stranded oligonucleotides (dsOligo ) 被克隆进 pGCL-GFP/U6 原生质标志，它被聚合酶链反应(PCR ) 和 DNA 定序分析随后证实。实时 PCR 并且西方弄污被用来在 293T 房间屏蔽有效 pGCL-GFP-shRNA 原生质标志，然后，最有效的被挤进有包装材料 pHelper 的 lentiviral 的 recombinant lentivirus Lv-VIM-shRNA 1.0 并且 pHelper 2.0 在 293T 房间。lentivirus 的 titer 被 hole-by-dilution titer 试金决定。在 Panc-1 房间的 Lv-VIM-shRNA 的 silencing 效果被即时 PCR 验证并且西方弄污。结果有效 Lv-VIM-shRNA 成功地被构造。lentivirus 的 titer 在 2 ×上被决定 10 9 TU/mL。活力 mRNA 和 vimentin 的表情是在感染 Lv-VIM-shRNA 的 Panc-1 房间的 down-regluated。有效 Lv-VIM-shRNA 能在 vitro 在 Panc-1 房间禁止活力基因的表示的结论，它为在发信号的小径调查活力基因的角色提供一个工具在胰腺的癌症和寻找的新治疗学的目标的 tumorigenesis 和前进包含了。