利用定点饱和突变和高通量筛选技术解除北京棒杆菌天冬氨酸激酶反馈抑制作用的探索与研究

摘要

本研究以北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)AK(CpAK)基因为研究对象,选择与其反馈抑制密切相关的氨基酸残基A297进行定点饱和突变,并进行高通量筛选和酶动力学研究,获得酶活力较高的突变体A297K AK,其最大反应速率(Vmax)较未突变的CpAK(WT AK)提高9.55倍,Km值升高,n值降低.酶学性质表征结果显示:其最适反应温度由25°C提高到30°C;最适pH未发生改变,仍为8.0;最适条件下的稳定性由3.5h延长为5h;低浓度苏氨酸、赖氨酸及二者的协同抑制被成功解除.