整体型级联酶微反应器的制备及用于DNA快速酶解

摘要

本研究提出研制多酶级联的固定化酶反应器用于基因组DNA的快速酶切分析。首先，根据溶胶—凝胶法制备了连续多孔的毛细管硅胶整体柱作为固定化酶载体。其次，采用席夫碱式反应或NHS/EDC法，将全能核酸酶( Benzonase)、蛇毒磷酸二酯酶(SVP)及碱性磷酸酶(APLase)共价键合到毛细管整体柱上。最后，将3种酶微反应器按次序用准零死体积接头串联，调整酶切缓冲液的组成及pH，构建Benzonase-SVP-APLase级联酶微反应器。本实验采用毛细管硅胶整体柱为载体，通透性好，背压低，易实现手动和注射泵进样酶切操作。采用了酶活力更高、非特异性更好的Benzonase内切酶来代替常用的DNaseI，优化了酶解体系的pH，制得的硅胶毛细管整体柱固定化酶反应器可以在20min左右酶解95%以上的基因组DNA为单核苷，为基因组DNA中痕量碱基修饰或损伤的分析提供了快速全酶切工具。