快速检测猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒感染的多重RT-PCR方法的建立与应用

摘要

为了建立一种能够快速检测猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻和猪轮状病毒感染的敏感、特异的多重RT-PCR(mRT-PCR)方法,本试验分别针对TGEV和PEDV的N基因、RVA的VP7基因设计了4对引物(其中针对PEDV N基因的引物为内、外两对),结合mRT-PCR和PEDV的套式RT-PCR(nRT-PCR),建立了同时检测TGEV和PEDV、RVA的mRT-PCR方法.mRT-PCR能够同时扩增出针对三种病毒的预期大小的目的核苷酸片段,并且可以与猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪伪狂犬病及猪圆环病毒2型感染进行鉴别诊断.该方法可以检测到TGEV、PEDV和RVA的最低核酸浓度分别为803.9pg/μL、16.07pg/μL和321.5pg/μL.应用mRT-PCR检测了133份腹泻仔猪的血清、肛拭子或小肠组织,其中TGEV、PEDV与RVA的阳性率分别为12.1％、88.0％和21.9％,并检测到了PEDV与RVA或TGEV双重感染及PEDV、TGEV和RVA三重感染的样品.在检测临床样品时,mRT-PCR和单项RT-PCR检出TGEV、PEDV和RVA的符合率分别为93.54％、96.77％和93.54％.上述结果表明,mRT-PCR能够快速鉴别检测猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻和猪轮状病毒感染三种传染病,PEDV是引起当前仔猪腹泻的主要病原.