猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其初步应用

摘要

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)是引起仔猪腹泻和死亡的主要病因之一，本实验根据TaqMan探针荧光定量分析原理，设计两对引物和两条探针，分别以FAM和JOE标记探针。以T7体外转录试剂盒得到的RNA为标准品，通过对反应条件的优化，建立了一步法TaqMan双重实时荧光定量RT-PCR(FQ-RT-PCR)检测PEDV和TGEV的方法。该方法具有良好的敏感性、重复性和特异性，能够检测到2×10(0)拷贝/ul的病毒RNA，重复性试验中Ct值变异系数CV％均不超过2％，对猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒进行FQ-RT-PCR，均检测不到荧光信号。应用本方法对浙江省176份病料进行检测时，其中PEDV阳性率97.7％，TGEV阳性率6.3％，混合感染率6.3％，表明浙江省猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎均有发生，但以猪流行性腹泻为主。