一种新型建立的脂肪变性细胞模型及线粒体能量代谢障碍评价

摘要

目的：探讨建立一种新型的脂肪变性HepG2细胞模型的方法,并对细胞线粒体能量代谢障碍程度进行评价. 方法：予25％的胎牛血清和0.1％的医用脂肪乳DMEM培养基初步诱导12h后,进一步予油酸和棕榈酸组成的0.1mmol/L游离脂肪酸(FFA) DMEM培养基再次诱导12h,建立脂肪变性HepG2细胞模型,并设置对照组比较.诱导成功后,采用油红O染色观察细胞内脂滴沉积状况,并用全自动生化仪检测细胞上清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量和细胞内甘油三酯(TG)含量;采用流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位的变化,采用磷钼酸比色法测定细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量,综合评测脂肪变性细胞线粒体能量代谢障碍的程度. 结果：与对照组比较,模型组细胞内橘红色脂滴大量形成,且TG含量明显升高(P＜0.01),ROS含量明显增高(P＜0.01),而线粒体膜电位及细胞内ATP含量显著降低(P＜0.01). 结论：采用25％胎牛血清、0.1％中/长链脂肪乳和0.1 mmol/L FFA分阶段诱导HepG2细胞,可以成功在体外建立脂肪变性细胞模型,该模型会引起细胞线粒体能量代谢紊乱,与NAFLD临床发病机制存在相似性.