重组fHbp在原核中的表达与纯化

摘要

目的:脑膜炎球菌(MenB)外膜蛋白fHbp是一种潜在的理想疫苗,本文旨在利用大肠杆菌原核表达系统获得该蛋白.rn 方法:根据GenBank中已知基因序列(HQ998858.1)设计引物通过PCR的方法从MenB毒株(53210)扩增fHbp基因,并连入原核表达载体pEASY-E1中,重组子经验证正确后转化大肠杆菌BL21感受态细胞后,优化诱导的IPTG浓度、诱导时间、诱导温度条件.rn 结果:经PCR检测结果表明成功的构建了原核表达载体pEASY-E1-rfHbpo.SDS-PAGE结果表明不同诱导条件中，诱导表达在时问为6h,温度37度，IPTG浓度为0.5mol/L时，重组蛋白fHby表达量最高。Western-Blot结果进一步证明大小为27kDa的蛋白条带为目的蛋白。并通过Ni-NTA亲和层析获得纯化的rfhbP蛋白。rn 结论:通过大肠杆菌原核表达成功获得了rfhbP重组蛋白，为进一步验证rfhbP生物学活性及MenB疫苗开发奠定基础。