重组人降钙素基因相关肽在原核中的融合表达、纯化研究

摘要

α降钙素基因相关肽具有强大的舒张血管、降低血压等多种生理活性，是迄今发现的人体内舒血管活性最强的一种多肽。α降钙素基因相关肽参与多种功能的调节，对α降钙素基因相关肽的研究也从最初的神经系统、心血管系统扩展到呼吸系统、内分泌系统、胃肠道系统、生殖系统、免疫系统。α降钙素基因相关肽在体内，尤其是神经和心血管系统分布广泛，并有显著的心血管效应，对心血管疾病的发生和防治有重要意义。 采用大肠杆菌偏爱的密码子对α降钙素基因相关肽基因进行了优化设计，用搭桥PCR方法获得hαCGRP基因，克隆到表达载体中。测序结果表明，构建的表达载体中的外源基因的序列与理论设计的基因序列完全一致。 融合蛋白基因在大肠杆菌中诱导表达，表达产物经凝胶扫描分析，融合蛋白占总蛋白的25％。摸索诱导表达条件，并扩大至发酵罐进行发酵培养和表达，获得大量菌体。破菌离心后融合蛋白表达完全在上清。上清液依次经过ChelatingF.F.亲和层析柱、SephacrylS-200分子筛柱纯化，获得了95％以上纯度的融合蛋白。经WesternBolt免疫印迹鉴定该融合蛋白具有抗原性。经体内对融合蛋白的生物学活性进行的初步研究表明该蛋白具有降低血压等α降钙素基因相关肽的生物学活性。 本研究成功构建了α降钙素基因相关肽融合蛋白表达载体，并在大肠杆菌中获得表达。通过基因工程获取较高纯度和生物学活性的α降钙素基因相关肽融合蛋白，同时对α降钙素基因相关肽的基因的表达、纯化等实验条件进行摸索和探讨，为基因工程α降钙素基因相关肽的进一步研究积累了科学资料和实验依据，也为α降钙素基因相关肽基因工程药物的开发研究及相关基础研究打下一定的基础。

目录

摘要

前言

一、实验材料及方法

三、讨论

四、小结

参考文献

论文综述 降钙素基因相关肽及其在免疫系统的功能

附录

致谢

作者简历及发表的文章

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