牛樟芝se原核表达载体构建及重组蛋白的表达、纯化

摘要

鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)是多数中草药植物、药用菌中三萜合成途径中的限速酶,能影响三萜含量的积累.构建了牛樟芝鲨烯环氧酶基因(se)原核表达载体,并进行其重组蛋白诱导表达条件优化.以牛樟芝cDNA为模板扩增se,纯化后将其克隆到pMD 18-T载体上,筛选阳性克隆并将其连接到原核表达载体pET28a,构建重组质粒pET-28a-se,经酶切验证后转化E.coil BL21 (DE3)感受态细胞进行诱导表达,利用L9(34)正交试验优化目的蛋白诱导表达条件及纯化.结果表明,不同正交处理间的蛋白表达差异显著(P＜0.05),其诱导因素的主次为时间＞温度＞ IPTG浓度,诱导时间对重组蛋白表达影响最显著(P＜0.05).而IPTG浓度和温度对重组蛋白表达影响并不显著(P＞0.05),且当IPTG终浓度为0.2 mmol/L,诱导时间为7h,诱导温度为26℃时,对SE重组蛋白的诱导效果最佳.