抗猪肺炎支原体特异性P36蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

表达P36基因的重组菌BL21(6P-1-P36)经诱导表达,超声波裂解后高速离心,分别收集上清和沉淀.可溶性表达产物亲和层析纯化后用于检测;同时,用GST-P36包涵体沉淀腹腔注射免疫BALB/c小鼠(400μg/只).利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得了一株能分泌特异性抗体的单克隆细胞株5A7-2.生物学特性鉴定表明,腹水单抗的间接ELISA效价为1:2.5×10<'6>;免疫球蛋白亚类为IgG<,2a>.免疫印迹结果显示,腹水单抗与GST-P36融合蛋白反应而不与GST蛋白反应,并且在猪肺炎支原体(Mhp)蛋白36 kD位置也有明显的条带,说明细胞株5A7-2所分泌的是针对Mhp P36蛋白的单抗.P36蛋白携带Mhp种特异性抗原表位,并且重组P36蛋白的抗体也不与其它支原体或细菌反应,因此,其单克隆抗体的制备,为Mhp种特异性检测方法的建立奠定了基础.