携带HBVC基因重组MVA假病毒颗粒的构建及抗原性鉴定

摘要

目的：构建携带HBVC基因的重组MVA假病毒颗粒,为进一步评价其作为基因治疗工具的价值奠定基础。方法 将HBVC基因通过基因重组构建入穿梭载体pSC11,得到质粒pSC11-C,将此质粒转染MVA病毒感染的原代鸡胚细胞单层,通过同源重组得到MVA-C,采用特异性PCR鉴定重组病毒。经过X-gal筛选,9次克隆传代得到单克隆重组病毒。将病毒培养物经蔗糖梯密度离心纯化后滴定病毒滴度。结果 采用PCR和基因测序等鉴定证实得到的假病毒颗粒携带HBVC基因,并且具有良好的抗原性。重组病毒的滴度为2.6×10<'9>pfu/ml。结论 本试验成功的构建了携带HBVC基因的重组MVA假病毒颗粒MVA-C,为研究HBV慢性感染的基因治疗提供了新的途径。