鸡BLec基因重组蛋白的原核表达及兔多抗制备

摘要

为了制备鸡BLec蛋白的多克隆抗体,本实验采用RT-PCR技术从2月龄B15单倍型鸡的胸腺组织扩增了ChBLec基因,并以pET-30a(+)为原核表达载体成功构建重组质粒pET-30a-ChBLec,并在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG(0.02mmol/L)诱导表达,获得大小约为17kDa以包涵体形式存在的ChBLec重组蛋白.把含有重组蛋白的SDS-PAGE胶研磨后制备免疫原,免疫新西兰兔,获得兔抗血清.Western blot检测显示,兔抗血清能检测到pET-30a-ChBLec外源蛋白.结果表明：ChBLec基因在大肠杆菌成功表达,且成功制备了兔抗ChBLec血清,该血清可进一步用于检测ChBLec蛋白在鸡体内的表达情况.