猪瘟病毒EO蛋白的原核表达及其重组蛋白活性测定

摘要

通过重叠PCR合成猪瘟病毒EO基因,将该片段定向插入到pET-22b载体中,构建原核表达载体pET-22b／EO,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,比较不同诱导条件下的蛋白表达,确定其最佳表达条件。重组蛋白主要以包涵体的形式表达,Ni2+亲和层析柱纯化蛋白,逐步透析法复性。通过方阵试验确定包被抗原的最适工作浓度,为了测定EO蛋白的活性,本文初步建立了检测猪瘟血清抗体水平的间接 ELISA方法,为开发检测猪瘟抗体诊断试荆奠定基础。