基因工程生产用原核表达质粒载体——pKpL5及其构建方法

摘要

本发明公开了一种基因工程生产用原核表达质粒载体——pKpL5及其构建方法，其特征在于：在含有双启动子、双SD区、rrnb转录终止子的pKpL4原核质粒载体的起始码下游嵌入人工合成的六聚组氨酸编码区、16s rRNA3’端互补区、凝血酶识别位点编码区接头，三个接头的5’端分别含限制性核酸内切酶Nco I、Bam HI、Bam HI残存碱基。该质粒载体能大大提高目的基因的表达效率，从而提高目的蛋白的产量，我们使用该质粒载体表达人生存素单体、双体和利什曼原虫LACK抗原，经SDS-PAGE电泳后用Quantity ONE(Bio-Rad公司)软件分析，目的蛋白的表达量分别占全菌总蛋白量的5.1％，19％和35％。同时本发明还能简化目的蛋白的纯化程序，降低目的蛋白的生产成本。原核表达质粒载体——pKpL5可用作原核高效表达通用质粒载体表达各种目的的基因。