一种利用微小RNA高效抑制曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后褐化现象的方法

摘要

本发明涉及一种利用微小RNA(microRNA，miRNA)高效抑制曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后褐化现象的方法，属于基因工程的技术领域，是借助根癌农杆菌介导的双元载体转化系统把水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus xmedia)细胞中。利用优化的转化方法获得了转基因细胞。结果显示：转空载体的对照细胞褐化严重、细胞停止生长，而转水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体的曼地亚红豆杉细胞则不发生褐化，细胞生长正常。本发明高效地阻止了曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后的褐化现象，解决了曼地亚红豆杉细胞在根癌农杆菌转化后停止生长的难题，为顺利获得曼地亚红豆杉转基因细胞系提供一种新方法。