一种基于PD-1/PDL-1阻断功能及生物效应的抗癌药物快速筛选方法

摘要

本发明建立了一种基于PD‑1/PDL‑1阻断功能及其生物效应的药物快速筛选方法：将红色荧光蛋白RFP接于PDL‑1蛋白C端，构建PDL‑1‑RFP融合蛋白；将抗CD3的抗体通过一个人工跨膜节段偶联于MHC II蛋白下游，构建MHCII‑antiCD3融合蛋白；将人源PD‑1基因构建在高表达启动子CMV的下游，后续连接T细胞核因子转录应答元件与TATA‑Like Promoter以及绿色荧光蛋白基因d2EGFP，构建慢病毒载体，并建立高表达PD1的CMV_PD1.NFAT_d2EGFP/Jurkat稳转细胞系，以PDL‑1‑RFP与细胞系的亲和进行荧光检测筛选阻断剂。本方法可精确反映抗PD‑1或抗PDL‑1药物的PD‑1/PDL‑1阻断功能以及通过对PD‑1/PDL‑1的阻断作用对NFAT信号通路产生的生物学效应，判断其是否可以提高T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。