农杆菌介导的活体幼胚转化获得转基因棉花的方法

摘要

一种农杆菌介导的活体幼胚转化获得转基因棉花的方法，由无菌胚剥离、制备转化液、震荡侵染、制备转基因棉花、转基因植株鉴定步骤组成。在无菌胚剥离中，将30％双氧水与无菌水配制成消毒液，棉种脱绒放入消毒液中，25℃、浸泡24小时，取出种子放在培养皿内，切掉种皮和1/3～1/2子叶，剩余的棉花胚放入含有基础培养基的培养皿中，让棉花胚受伤；在制备转化液步骤中，诱导液由乙酰丁香酮与硫酸镁制成，乙酰丁香酮能够诱导农杆菌Vir基因活化，提高外源基因整合的效率；在震荡侵染步骤中，转化液中加入Silwet L‑77和MS液体培养基，使农杆菌更大范围覆盖在棉花胚上。本发明具有易于筛选、棉花的生长周期短、易于操作、转化效率等优点。