一种蓝莓花色苷在制备非酒精性脂肪肝药物中的应用

摘要

本发明公开了一种蓝莓花色苷在制备非酒精性脂肪肝药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明首次发现从蓝莓果皮中提取的花色苷能有效改善高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝，抑制肥胖，改善肝功能受损和炎症。该蓝莓花色苷能抑制实验小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性，降低总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL‑C)、高密度脂蛋白(HDL‑C)、丙二醛(MDA)含量的增加和血清肿瘤坏死因子(TNF‑α)、血清白介素‑1β(IL‑1β)的释放。此外，该蓝莓花色苷还可明显改善实验小鼠肝脏形态、降低脂质积累。基于此，本发明提供了蓝莓花色苷在制备治疗非酒精性脂肪肝、肥胖等代谢疾病药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种蓝莓花色苷在制备非酒精性脂肪肝药物中的应用。

背景技术

非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种由于脂肪在肝脏内过度积累而引起的肝脏疾病，被认为与肥胖和胰岛素抵抗密切相关，被认为是代谢综合征在肝脏上的表现。这一疾病通常与肥胖、Ⅱ型糖尿病、高血压和高胆固醇等代谢异常相关，在NAFLD患者中，脂肪在肝脏中的过度积累可能会引起肝炎、纤维化、肝硬化以及肝癌等严重后果。据估计，NAFLD在成年人中的患病率在20％-30％之间，在肥胖患者中达到90％，已经成为最常见的肝病，严重威胁人体健康，其预防和控制刻不容缓。

随着现代社会的发展和科学研究的不断深入，为人们提供了更多预防和治疗疾病的药物和方法。同时，西方药物的局限性和不确定的副作用也逐渐体现出来，因此，人们开始把研究方向转向为天然可食用的植物上。蓝莓是杜鹃花科越橘属的多年生浆果，外观呈现深蓝色、紫色或黑色，口感甜酸适中，富含糖类、有机酸、维生素、膳食纤维、多酚等多种营养成分，具有抗菌、抗炎、保护视力等作用。研究表明，蓝莓可以帮助控制血糖、降低血脂、改善视力、提高认知能力、预防心血管疾病和癌症等。此外，蓝莓口感鲜美，可以作为饮食中的一种水果来增加膳食纤维和其他重要营养素的摄入。现在，蓝莓已经成为了全球食品市场上的热门产品，其生产和消费已经得到了广泛关注。在蓝莓的众多营养成分中，花青素是蓝莓中最具特色的的一类黄酮类物质，常常以花色苷(anthocyanins)形式存在，主要包括天竺葵素、矢车菊素、飞燕草素、芍药花素、牵牛花素和锦葵花素，它们常常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等通过糖苷键结合形成花色苷。已有的研究表明，花色苷具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生理活性。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足(如化学药物的副作用等)，提供一种来源于天然果品的蓝莓花色苷在制备非酒精性脂肪肝药物中的应用。

本发明采用以下技术方案来实现：

本发明提供一种蓝莓花色苷，该蓝莓花色苷能有效抑制血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性，调节总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、丙二醛(MDA)含量及口服葡萄糖耐量(OGTT)及其曲线下面积(AUC)的增加和血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、血清白介素-1β(IL-1β)的释放，具有显著的改善糖耐量异常、肝脏损伤和肥胖的功效，可以应用于制备治疗非酒精性脂肪肝、肥胖等代谢性疾病的药物。

作为本发明的进一步优化方案，所述蓝莓花色苷从蓝莓果皮中提取。

作为本发明的进一步优化方案，在用蓝莓花色苷制备药物时可加入药学上可接受的辅料制成临床可用的药物剂型。

作为本发明的进一步优化方案，所述药物剂型为片剂、胶囊剂、锭剂、注射剂、混悬剂、栓型、软膏剂中的一种或多种。

作为本发明的进一步优化方案，所述辅料为载体或赋形剂。

作为本发明的进一步优化方案，所述赋形剂为碳微晶纤维素、淀粉、乳糖、交联聚维酮、羟丙基纤维素中的一种或多种。

作为本发明的进一步优化方案，所述载体为稀释剂、崩解剂、粘合剂或润滑剂中的一种或多种。

作为本发明的进一步优化方案，所述药物中蓝莓花色苷的相对含量应大于30％。

本发明的有益效果在于：本发明首次发现从蓝莓果皮中提取的花色苷能有效改善高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝，抑制肥胖、改善肝功能受损和炎症。此外，蓝莓花色苷还可明显的改善肝脏形态、降低脂质积累。基于此，本发明提供了蓝莓花色苷在制备治疗非酒精性脂肪肝、肥胖等代谢疾病药物中的应用。

附图说明

图1为本发明实施例中所用蓝莓花色苷的HPLC图；

图2为本发明实施例中各组小鼠体重的变化对比图；

图3为本发明实施例中各组小鼠体重增加量对比图；

图4为本发明实施例中各组小鼠血清ALT的变化对比图；

图5为本发明实施例中各组小鼠血清AST的变化对比图；

图6为本发明实施例中各组小鼠血清TC的变化对比图；

图7为本发明实施例中各组小鼠血清TG的变化对比图；

图8为本发明实施例中各组小鼠血清LDL-C的变化对比图；

图9为本发明实施中各组小鼠血清HDL-C的变化对比图；

图10为本发明实施中各组小鼠OGTT及AUC的变化对比图；

图11为本发明实施例中各组小鼠血清TNF-α的变化对比图；

图12为本发明实施例中各组小鼠血清IL-1β的变化对比图；

图13为本发明实施例中各组小鼠血清MDA的变化对比图；

图14为本发明实施例中各组小鼠的肝脏形态图；

图15为本发明实施例中各组小鼠的肝脏组织油红染色对比图。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示，进一步阐述本发明。

1、材料

本实施例所用方法如无特别说明均为本领域的技术人员所知晓的常规方法，所用的试剂等材料如无特别说明均为市售购买产品。比如，将蓝莓花色苷制备成片剂、胶囊剂、锭剂、注射剂、混悬剂、栓型、软膏剂等剂型的方法均为常规方法，所述药物中蓝莓花色苷的相对含量应大于30％，所用的载体或赋形剂等材料，其中赋形剂为碳微晶纤维素、淀粉、乳糖、交联聚维酮、羟丙基纤维素；载体为稀释剂、崩解剂、粘合剂或润滑剂，如无特别说明，均为市售购买产品。

实验所用蓝莓花色苷从蓝莓成熟果实的果皮中提取纯化得到，纯度为53.57％，其高效液相色谱图如图1。

实验所用雄性C57BL/6J小鼠，购自于中国江苏协同生物公司。

2、方法

2.1实验动物分组及处理

雄性C57BL/6J小鼠，适应性喂养一周后，正常对照组小鼠给予正常饲料，模型组小鼠给予高脂饲料。8周后，小鼠进行分组，①原正常对照组仍为正常组，模型组小鼠则随机分为②模型对照组、③蓝莓花色苷组、④阳性对照组。正常对照组与模型对照组小鼠以纯水灌胃，蓝莓花色苷组以100mg/Kg剂量的蓝莓花色苷灌胃，阳性对照组以100mg/Kg剂量的二甲双胍灌胃。每组小鼠为8只。饲喂期间，每周称量一次体重。

2.2样品采集、处理

16周后，小鼠禁食6h，在处死前采用10％水合氯醛麻醉小鼠(0.03mL/10g)，摘眼球取血，处死，对血样进行离心，取血清。解剖后，取出肝脏组织，切片，一部分放入4％多聚甲醛中固定。血清和肝脏组织样本置于超低温冷冻冰箱保存。

2.3生理生化指标测定

(1)血糖、ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C测定

将保存的血清样本从超低温冷冻冰箱中取出，放置于冰盒中等待检测。按照试剂盒说明书要求检测ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C指标。

(2)MDA、TNF-α、IL-1β含量测定

将保存的血清样本从超低温冷冻冰箱中取出，放置于冰盒中等待检测。按照ELISA试剂盒进行操作。

(3)组织形态学观察

脂肪组织取出后，迅速用4％多聚甲醛溶液固定24h，然后包埋于石蜡中切片，6μm厚，然后脱蜡，用油红O染色，脱水，使用中性树脂封片，最后在光学显微镜下进行观察并拍照。

3、实验结果

3.1体重、体重增加量

如图2、图3所示，给药16周后，与正常对照组相比，模型对照组小鼠的体重、体重增加量显著增加；与模型对照组相比，蓝莓花色苷组和二甲双胍组小鼠的体重、体重增加量显著降低。

3.2血清ALT、AST

如图4、图5所示，给药16周后，与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清ALT、AST显著增加；与模型对照组相比，蓝莓花色苷组和二甲双胍组小鼠血清ALT、AST含量显著降低。

3.3血清TC、TG、LDL-C、HLD-C

如图6、图7、图8、图9所示，给药16周后，与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清TC、TG、LDL-C含量显著增加，HDL-C含量显著降低；与模型对照组相比，蓝莓花色苷组小鼠TC、TG、LDL-C含量显著降低，二甲双胍组小鼠TC、TG含量显著降低，LDL-C也呈现降低趋势；此外，蓝莓花色苷组和二甲双胍组小鼠的HDL-C含量均显著增加。

3.4OGTT及AUC

如图10所示，给药16周后，与正常对照组相比，模型对照组小鼠AUC_OGTT显著升高，口服葡萄糖耐量受损；与模型对照组相比，蓝莓花色苷组小鼠AUC_OGTT水平显著降低，二甲双胍组小鼠AUC_OGTT也呈现降低趋势，但未达到显著水平。

3.5炎症因子

如图11、图12所示，给药16周后，与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清TNF-α、IL-1β分泌显著增加；与模型对照组相比，黑蓝莓花色苷组、二甲双胍组小鼠血清TNF-α、IL-1β含量显著降低。

3.6MDA

如图13所示，给药16周后，与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清MDA水平显著增加；与模型对照组相比，蓝莓花色苷组、二甲双胍组小鼠血清MDA含量显著降低。

3.7组织形态

如图14、图15所示，给药16周后，与正常对照组小鼠肝脏相比，模型对照组小鼠肝脏发生异变，发黄且硬化；与模型对照组肝脏相比，蓝莓花色苷组、二甲双胍组小鼠肝脏得到不同程度的恢复，没有出现异变。此外，与模型对照组相比，蓝莓花色苷、二甲双胍显著改善了高脂饮食诱导的小鼠肝脏油脂的积累。

4、实验结论

本试验采用高脂饮食饲料长期饲喂小鼠，诱导其形成非酒精性脂肪肝的小鼠模型，研究蓝莓花色苷对脂质代谢异常、非酒精性脂肪肝、肥胖等代谢性疾病的治疗作用。结果表明，高脂饮食可以引起小鼠肥胖、脂质代谢、糖代谢异常和肝脏受损，促进炎症因子的分泌。与正常对照组相比，模型对照组小鼠体重显著增加，脂质代谢指标TC、TG、LDL-C等，肝损伤指标ALT、AST，炎症因子TNF-α、IL-1β及氧化应激指标MDA显著增加，出现肝脏损伤、炎症、肥胖等症状。饲喂蓝莓花色苷可以通过降低体重、血清ALT、AST等指标改善肝脏损伤和肝硬化。此外，蓝莓花色苷还能够降低炎症因子的分泌，改善糖、脂质代谢异常。这些指标的改善，能显著缓解非酒精性脂肪肝、肥胖和血脂异常。

综上所述，补充蓝莓花色苷能有效改善高脂饮食小鼠诱导的非酒精性脂肪肝。抑制ALT、AST、TC、TG等指标的增加，抑制炎症因子TNF-α和IL-1β的释放，改善高脂饮食诱导的肝脏变性和脂质积累。此外，蓝莓花色苷对糖脂代谢的调节作用优于二甲双胍，说明蓝莓花色苷能够代替二甲双胍成为治疗高血糖和非酒精性脂肪肝的药物。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制。上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。