免疫磁分离结合实时荧光定量PCR的检测方法及其在食源性致病菌快速检测中的应用

摘要

本发明公开了免疫磁分离结合实时荧光定量PCR的检测方法及其在食源性致病菌快速检测中的应用，包括：(1)免疫磁珠制备：用无菌PBS洗涤羧化MNPs，然后在含有EDC和NHSS的无菌PBS中，以激活羧基去除多余的活化试剂；将PEI加入活化MNPs中，偶联；去除多余PEI；清洗并再次悬浮PBS中；(2)将菌液与PEI‑MNPs混合，孵育，形成细菌‑PEI‑MNPs复合物；(3)然后将上清液和细菌‑PEI‑MNPs复合物分别在相应平板上培养，进行细菌计数；(4)目的基因提取后，采用实时荧光定量PCR。可以将食品中的致病菌非特异性富集出来，方便后续检测；实时荧光定量PCR相比较于普通PCR检测灵敏度更高，特异性好；本发明的方法能够应用于食源性致病菌的快速检测。