一种防治甲型流感病毒引起肺炎的鼻腔给药制剂及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种防治甲型流感病毒引起肺炎的鼻腔给药制剂及其制备方法和应用，属于药物活性成分用途技术领域。鼻腔给药制剂包括石斛精制多糖2～10份、泊洛沙姆40715～25份、泊洛沙姆1885～15份、聚乙二醇60001～3份、水溶性氮酮1～3份、苯扎氯铵0.01～0.1份和水43.9～75.99份。本发明提供的鼻腔给药制剂能够防治甲型流感病毒引起肺炎，鼻腔给药制剂延长了药物在鼻腔停留的时间。

说明书

技术领域

本发明属于药物活性成分用途技术领域，尤其涉及一种防治甲型流感病毒引起肺炎的鼻腔给药制剂及其制备方法和应用。

背景技术

石斛是我国的一味重要中药材，应用历史悠久，历代本草和《中华人民共和国药典》均有收载，始载于东汉末年《神农本草经》，列为上品，谓具“主伤中，除痹，下气，补五脏虚劳羸瘦，强阴。久服厚肠胃，轻身延年。”《本草纲目》称石斛“强阴益精。久服厚肠胃。补内绝不足，平胃气，长肌肉……轻身延年”。《中华人民共和国药典》记载石斛具有益胃生津、滋阴清热的功效，用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明，现代药理学研究报道其具有抗氧化、护肝、抗肿瘤及免疫调节等作用。多糖是石斛的主要活性成分，但石斛中所含有的多糖很多，非常复杂，无法知道其中真正起效的活性成分。近年来，石斛主要被应用于保健食品，免疫调节是其主要的保健功能。但未发现有石斛多糖应用于防治流感病毒的报道。

鼻腔和肺同属呼吸系统，两者之间有着密切的联系。在传统中医理论中，认为肺开窍于鼻，《疮疡经验全书》记有＂鼻在面中，为肺之窍，其气上通于脑，下行于肺＂。《灵枢》记有：“十二经脉，三百六十五络，其血气皆上于面而走空窍，纳鼻而传十二经”。

现代医学研究表明，鼻中隔将鼻腔纵向分开，由鼻孔延伸至鼻咽，长度约为12～15cm。成年人的鼻腔容积约为15mL，其表面覆盖着2～4mm厚的鼻黏膜，总面积约为150cm

原位凝胶(in situ gel)即在位凝胶，是一类以溶液状态给药后，能在用药部位立即发生相转变，由液态转化形成非化学交联半固体凝胶的制剂。药物与凝胶材料可以制成均一、混悬的乳胶稠厚液体或半固体的凝胶剂。凝胶剂具有良好的组织相容性，在给药部位滞留时间长；同时可起到贮存药物，防止药物受环境影响等作用。根据形成机制的不同，可以将原位凝胶分为温度敏感型、pH敏感型以及离子敏感型等。原位凝胶剂作为一种新型的药物剂型，广泛用于缓释、控释及脉冲释放等新型给药系统，原位凝胶可应用于皮肤、眼部、鼻腔、口腔、阴道、直肠等多种途径给药。现今，原位凝胶给药系统已成为药剂学与生物技术领域的一个研究热点。

因此，若将石斛精制多糖、鼻腔给药系统、原位凝胶制剂三者有机结合，有望提供一种创造性产品。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种防治甲型流感病毒引起肺炎的鼻腔给药制剂及其制备方法和应用，本发明提供的鼻腔给药制剂能够防治甲型流感病毒引起的肺炎。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明还提供了一种防治甲型流感病毒引起肺炎的鼻腔给药制剂，包括以下重量份数的组分：

石斛精制多糖2～10份、泊洛沙姆40715～25份、泊洛沙姆1885～15份、聚乙二醇60001～3份、水溶性氮酮1～3份、苯扎氯铵0.01～0.1份和水43.9～75.99份。

优选的，所述石斛精制多糖包括：甘露糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸中的任意两种及以上单糖组成。

本发明还提供了一种上述技术方案所述的鼻腔给药制剂的制备方法，包括以下步骤：

A、将所述石斛精制多糖、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、聚乙二醇6000和水混合，在4℃下静置12h以上，得到透明溶液；

B、将所述步骤A得到的透明溶液与水溶性氮酮、防腐剂混合，得到鼻腔给药制剂。

本发明还提供了上述技术方案所述的鼻腔给药制剂在制备防治甲型流感病毒引起肺炎的药物中的应用。

本发明的有益效果为：

1)本发明中，首先从我国常用的石斛属植物紫皮石斛中分离纯化到一种对预防和治疗流感病毒性肺炎有积极作用的新型精制多糖，与现有技术相比，该精制多糖为新型均一多糖，相比粗多糖，该均一多糖成分清晰，具有明确的分子量、单糖组成、摩尔比等。

2)本发明中，创造性的将新型石斛精制多糖制备成鼻腔给药的剂型，更优特点是该鼻腔给药剂型还是即型凝胶制剂，不是简单的喷雾剂，相较于常规喷雾剂，本发明鼻腔给药制剂喷出后在鼻腔处成即型凝胶，停留更长时间，更有利于药物的作用。

3)本发明中，将新型石斛精制多糖、原位凝胶剂型、鼻腔给药制剂有效结合，起到很好的预防或治疗甲型流感病毒的作用，具有创造性的显著进步。新型石斛精制多糖为从天然植物紫皮石斛中分离纯化到的一种新型均一多糖，具有显著的预防和治疗甲型流感病毒性肺炎的作用。原位凝胶即在位凝胶，是一类以溶液状态给药后，能在用药部位立即发生相转变，由液态转化形成非化学交联半固体凝胶的制剂，凝胶剂具有良好的组织相容性，在给药部位滞留时间长；同时可起到贮存药物，防止药物受环境影响等作用。鼻腔给药是一种无创给药途径，同时经鼻给药的血药水平有时甚至可以与静脉注射相比，甚至可以作为注射给药的代替方法，但由于药物在鼻腔的停留时间过短，存在患者间的生物利用度相差很大。本发明中制备成即型凝胶制剂的鼻腔给药制剂，使制剂以液体形式喷入鼻腔后胶凝成半固体黏附在鼻黏膜上，使药物停留更长时间，更有利于有效成分的吸收。本发明技术将三者有机结合，具有创造性的显著进步。

4)本发明鼻腔给药制剂使用方便，安全有效，应用前景广阔。

附图说明

图1为实施例2制备的原位凝胶体外释放曲线；

图2为实施例2原位凝胶累积溶蚀率曲线；

图3为实施例1制备的精制多糖对小鼠体重、肺器官指数、病毒含量和小鼠存活率的影响；

图4为实施例1制备的精制多糖对小鼠肺泡灌洗液中的炎性细胞和炎症因子水平的影响。

具体实施方式

本发明提供了一种防治甲型流感病毒引起肺炎的鼻腔给药制剂，包括以下重量份数的组分：

石斛精制多糖2～10份、泊洛沙姆40715～25份、泊洛沙姆1885～15份、聚乙二醇60001～3份、水溶性氮酮1～3份、苯扎氯铵0.01～0.1份和水43.9～75.99份。

本发明将所述石斛精制多糖制备成鼻腔给药制剂，更优特点是该鼻腔给药剂型还是即型凝胶制剂，不是简单的喷雾剂，相较于常规喷雾剂，本发明鼻腔给药制剂喷出后在鼻腔处成即型凝胶，停留更长时间，更有利于药物的作用。

本发明将所述石斛精制多糖、原位凝胶剂型、鼻腔给药制剂有效结合，起到很好的预防或治疗甲型流感病毒的作用，在本发明中，所述制剂以液体形式喷入鼻腔后胶凝成半固体黏附在鼻黏膜上，使药物停留更长时间，更有利于有效成分的吸收。本发明技术将三者有机结合，具有创造性的显著进步。

在本发明中，所述鼻腔给药制剂的使用方法优选包括：喷入鼻腔，每日1～3次。

本发明提供的鼻腔给药制剂包括重量份数为2～10份的石斛精制多糖，优选为3％。

本发明提供的鼻腔给药制剂包括重量份数为15～25份的泊洛沙姆407，优选为20％。本发明提供的鼻腔给药制剂包括重量份数为5～15份的泊洛沙姆188，优选为10％。

本发明提供的鼻腔给药制剂包括重量份数为1～3份的聚乙二醇6000，优选为2份。在本发明中，所述聚乙二醇6000的作用是调节粘度和熔点。

本发明提供的鼻腔给药制剂包括重量份数为1～3份的水溶性氮酮，优选为2％。在本发明中，所述水溶性氮酮作为促渗剂。

本发明提供的鼻腔给药制剂包括重量份数为0.01～0.1份的苯扎氯铵。

本发明提供的鼻腔给药制剂包括重量份数为62.95份的水。

在本发明中，所述石斛精制多糖优选包括：甘露糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸中的任意两种及以上单糖组成。本发明对所述石斛精制多糖的制备方法没有特殊限定，优选按照中国专利CN109400742B-一种齿瓣石斛精制多糖及其制备方法和应用中实施例1中公开的齿瓣石斛精制多糖的制备方法制备即可。

本发明还提供了一种上述技术方案所述的鼻腔给药制剂的制备方法，包括以下步骤：

A、将所述石斛精制多糖、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、聚乙二醇6000和水混合，在4℃下静置12h以上，得到透明溶液；

B、将所述步骤A得到的透明溶液与水溶性氮酮、苯扎氯铵混合，得到鼻腔给药制剂。

本发明还提供了上述技术方案所述的鼻腔给药制剂在制备防治甲型流感病毒引起肺炎的药物中的应用。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

石斛精制多糖的制备：按照中国专利CN109400742B-一种齿瓣石斛精制多糖及其制备方法和应用中实施例1中公开的齿瓣石斛精制多糖的制备方法制备。

实施例2

石斛精制多糖鼻用原位凝胶(石斛精制多糖鼻腔给药制剂)的组分，以质量百分比计：

其中，石斛精制多糖由实施例1制备得到。

石斛精制多糖鼻用原位凝胶的制备方法：

1)将石斛精制多糖、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、聚乙二醇6000，加适量水，置于4℃环境中存放12h以上，直至固体全部溶解，得到澄清透明的溶液；

2)取出步骤1)得到的溶液，待溶液恢复到室温，加入水溶性氮酮、苯扎氯铵、水，充分攒拌，即得石斛精制多糖鼻用原位凝胶。

实施例3

以实施例2制备的石斛精制多糖鼻用原位凝胶作为研究对象。

方法：

准确称取实施例2制备的原位凝胶1g置于5mL离心管中，先于恒温振荡器中使其形成凝胶后，精密称定凝胶与离心管的总重后加生理盐水1mL。将离心管置于(35±1)℃恒温振荡仪中，以100r/min的频率往复振荡，分别于15、30、45、60、90、120、180min将离心管中的溶液全部倒出，并用滤纸将离心管表面擦拭干后精密称定重量，前后2次离心管质量之差即为两个时间点之间的溶蚀量。向离心管中重新加入1mL生理盐水继续恒温振荡。测定每个时间点倒出的生理盐水中石斛精制多糖的含量，计算药物累积释放率Qn与累积溶蚀率X，X＝(W0－Wn)/(W0－W1)×100％，式中W0为加入生理盐水前凝胶与离心管的总重量(g)，Wn为第n次称重时凝胶与离心管的总重量(g)，W1为空离心管的重量(g)。

结果见图1、图2，表明石斛精制多糖原位凝胶在2h内被溶蚀完全，且主要是通过溶蚀方式释放出来的。

表1石斛精制多糖原位凝胶溶蚀结果

实施例4

材料和方法：

动物分组和模型制备：SPF级BALB/c雄性小鼠(17-19g，3-4周龄)在SPF级屏障系统中饲养，温度为20-25℃，湿度为50-60％，每天定期进行12小时光照和12小时黑暗循环。所有的老鼠都可以自由吃喝。

建立小鼠模型的方法如下：适应性喂养小鼠4天，将小鼠随机分为4组：对照组(蒸馏水，每日灌胃一次)、DVP-1(60mg/kg)组(每日灌胃60mg/kg的DVP-1)，DVP-1(15mg/kg)组(每日灌胃15mg/kg的DVP-1)、石斛粗多糖CP组(每日灌胃200mg/kg粗多糖，参照石斛多糖的临床剂量折算成小鼠剂量)，30天后，每组随机抽取10只小鼠进行免疫功能检测，其余20只小鼠在异氟醚轻度麻醉后，将50μL甲型流感病毒小鼠肺适应株A/Puerto Rico/8/1934(H1N1，PR8)病毒溶液(40LD

肺泡灌洗液(BALF)的收集和检测。小鼠安乐死，完全暴露气管，用针插管，并用PBS灌洗，按压小鼠胸部后，泵回的混合物是BALF。BALF染色后，在显微镜下计数细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。根据ELISA试剂盒的制造商说明，将BALF在4℃下以1500rpm/min离心5分钟，然后取上清液并稀释20倍，检测TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ的水平。

结果：

为了探索DVP-1的抗病毒感染能力，在小鼠感染PR8病毒株后第6天测量小鼠体重、肺器官指数、病毒含量和小鼠存活率。图3中A显示对照组中BALB/c小鼠的体重减轻最显著，DVP-1(60mg/kg)和CP组的体重减轻缓慢，且体重变化与对照组显著不同(P<0.05)。除此之外，DVP-1(60mg/kg)组的肺器官指数在4组中所占比例最低(图3中B)。从存活时间来看，对照组的BALB/c小鼠从第5天开始死亡，感染后14天对照组的存活率仅为10％，而DVP-1(60mg/kg)、DVP-1(15mg/kg)和CP组分别为70％、50％和80％(图3中C)。本发明使用实时PCR进一步分析了BALB/c小鼠肺中PR8的mRNA水平，从图3中D中可以看出，DVP-1(60mg/kg)组和CP组中PR8病毒的mRNA水平不到对照组的一半，差异有统计学意义(P<0.01)。综合来看，DVP-1可以缓解BALB/c小鼠的体重下降，降低脏器指数和病毒含量，提高小鼠存活率。这表明DVP-1在调节免疫系统后，能提高BALB/c小鼠的抗感染能力。

本发明比较了BALF炎症细胞的数量和比例，发现使用DVP-1后，总细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的数量显著下调(P<0.05)。如图4所示，DVP-1(60mg/kg)组感染小鼠的炎症最少。具体地，与对照组相比，DVP-1(60mg/kg)组和CP组中的炎症细胞总数分别减少了57％和60％(P<0.01，图4中A)。此外，DVP-1(60mg/kg)组的巨噬细胞比例增加(图4中B)，中性粒细胞比例减少(图4中C)。ELISA法检测BALF炎症因子水平，DVP-1(60mg/kg)组和CP组TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ显著降低(P<0.05)(图4中E-H)。这充分说明DVP-1在调节免疫后能很好地改善体内感染。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。