一种无抗性标记营养缺陷型枯草芽孢杆菌的构建方法与应用

摘要

本发明公开了一种无抗性标记营养缺陷型枯草芽孢杆菌的构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除了枯草芽孢杆菌WS9的丙氨酸消旋酶基因dal，构建了D‑丙氨酸营养缺陷型枯草芽孢杆菌WS9DAL。以枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌WS9DAL为表达宿主，构建了三株表达麦芽糖淀粉酶的基因工程菌WS9DAL1，WS9DAL2和WS9DAL3。在无抗生素添加的条件下，对三株基因工程菌进行摇瓶发酵培养，发酵培养60h时MAase酶活分别达到714U/mL，519U/mL和892U/mL。