副猪嗜血杆菌hhdB基因无抗性标记缺失自杀载体的构建

摘要

为了构建副猪嗜血杆菌hhdB基因无抗性标记缺失自杀载体,根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌hhdB基因上、下游同源臂序列(hhdB-up、hhdB-down)设计并合成2对特异性引物,PCR扩增hhdB-up和hhdB-down序列,经重叠PCR的方法将hhdB-up和hhdB-down序列进行拼接(hhdB-up+down),此拼接序列的两端引入了NotⅠ和SalⅠ限制性酶切位点,经相应酶切后将hhdB-up+down序列定向克隆到自杀性质粒载体pEMOC2中。结果表明:成功获得可在大肠杆菌E.β2155中稳定遗传的hhdB基因无抗性标记缺失自杀载体(pEMOC2ΔhhdB),从而为构建副猪嗜血杆菌hhdB基因无抗性标记缺失菌株奠定基础。