一种快速、精确构建大肠杆菌组氨酸营养缺陷型的方法

摘要

将表达Red体内重组蛋白的质粒pKD46转化大肠杆菌DHSa,用5′端与组氨酸基因同源,3′端与卡那霉素抗性基因同源的引物获得具有卡那霉素抗性基因的PCR产物,然后电击转化DHSa,在λRed重组系统的帮助下,通过卡那霉素抗性基因两侧的组氨酸基因序列在体内与大肠杆菌染色体上的组氨酸基因发生同源重组,置换了DH5a组氨酸操纵元中的hisDCB基因,最后利用卡那霉素抗性基因两端的FRT位点,通过FFP位点专一性重组将卡那霉素抗性基因去除,最终获得了不具抗性的大肠杆菌组氨酸营养缺陷型菌株.为在大肠杆菌及其他菌株中快速、精确的构建营养缺陷型菌株提供了有益的参考.