一种防水果裂腐病制剂，制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种防水果裂腐病制剂，制备方法及其应用，制备方法包括如下步骤：第一次复合培养，第二次复合培养，所述第一次复合培养分为厌氧联合培养阶段、好氧联合培养阶段，所述第二次复合培养以复合培养基为基础，接入培养复合厌氧种子液及复合好氧种子液制成复合微生物原液。本发明能够降低土壤pH值，抑制大多数致病菌，制剂中的微生物能提高土壤的生物活性，提高土壤有效养分的含量和果树对铁、钙等元素的吸收和利用率，增加果皮的厚度和韧性；防水果裂腐病微生态制剂中的微生物在生长繁殖过程中能分泌出大量的乳酸等有机酸、抗氧化物质、促生长物质等；直接喷洒到叶面或果实上，能够提高叶面的光合作用，刺激果皮生长，厚度和韧性增加，防治果裂及裂腐病。

说明书

技术领域

本发明涉及农业果品种植技术领域，特别涉及一种防水果裂腐病制剂，制备方法及其应用。

背景技术

中国的果树种植中，有很多易裂果的树种，如甜樱桃、桃、葡萄、枣、苹果、梨、石榴、荔枝、柚子、芒果等。一旦裂果，就很有可能引起病菌入侵，从而导致腐烂，也就是裂腐病。果实裂果后，品质严重下降，减产甚至绝收。以红枣为例，无论是金丝小枣或大枣，裂果都是普遍存在的严重问题之一。一般年份裂果浆烂率达15％左右，成熟期如遇多雨年份，高达50％～80％，易裂果品种一般年份裂果率为50％～70％，严重年份达95％以上。

产生裂果的原因：一是土壤条件：连年施用化肥和干旱造成的土壤中的钙离子被固定而造成的缺钙，果皮厚度和韧性差，易造成裂果；二是环境条件：地下水位低，土壤干湿不均，或气候原因造成的果树成熟期连阴雨，积水不能及时排走，水分吸收过多，造成果裂。三是人为原因：长期使用化肥农药，植株营养不均衡健康状况差，营养的吸收和利用能力下降。果裂后遇到雨水或夜露水的长期侵入，裂口变大，病菌感染后，果肉腐烂，造成较大的经济损失。

裂果问题是果品生产中最难解决的问题。目前一般根据裂果的成因采用以下解决方法：一是选择抗裂果的品种，但目前多数抗裂果品种的综合品质差强人意；二是从幼果期开始喷钙，0.2％～0.3％的硝酸钙或氯化钙，每15天就要喷洒一次；三是在果实的成熟期以后喷洒20～40mg/kg的赤霉素；四是生长季干旱时及时浇水。

现有技术中从幼果期开始喷洒0.2％～0.3％的硝酸钙或氯化钙，每15天喷洒一次。此技术的缺点在于叶面喷施，钙的吸收利用率差，喷洒间隔时间短，次数过于频繁，增产并不明显，效益差。

在果实的成熟期以后喷洒20～40mg/kg的赤霉素。此方案的缺点是：赤霉素虽然也是微生物生长过程的产物，但它是一种激素类的物质，不利于品质的改善，给食品的安全性带来一定的影响，并未从根本上解决问题。

从生态学的角度、尤其是农田生态工程学的角度来说，裂果问题是一个综合性的问题，涉及到：品种、土壤、水分及栽培管理等。单纯的调整一个环节、头疼医头、脚疼医脚，都不能从根本上解决问题。

鉴于上述因素，本申请人经过长期的试验研究，特别提出了一种防水果裂腐病制剂，制备方法及其应用，系统性的调整种植栽培的各个环节，以微生物菌群的作用贯穿植株生长的始终，提高植株自身的免疫抗逆性能，以复合微生物肥替代化肥，减少化肥不合理的使用，从而实现对裂腐病的防治。

发明内容

本发明的目的在于提供一种防水果裂腐病制剂，制备方法及其应用，在农业生态学、土壤学和作物营养学原理的指导下，采用微生态工程技术，从土壤植物和自然界本来就存在的有益(有效)微生物种群中筛选出多个共生性能好，抑制病原菌等有害微生物能力强，能有效调节土壤水分和养分有效性的微生物种群，主要是植物乳杆菌、圆褐固氮菌、沼泽红假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色链霉菌、巨大芽孢杆菌，采用厌氧和兼性厌氧相结合的发酵工艺，生产出的稳定的微生态制剂。

本发明的目的是通过下述技术方案予以实现：一种防水果裂腐病制剂，该防水果裂腐病制剂按重量百分含量由下述物质组成：圆褐固氮菌1％～5％、白色链霉菌1‰～3‰、枯草芽孢杆菌1‰～5‰、巨大芽孢杆菌1‰～5‰、沼泽红假单胞菌2％～10％、植物乳杆菌2％～15％。

进一步地，制备方法包括如下步骤：第一次复合培养，第二次复合培养；

所述第一次复合培养分为厌氧联合培养阶段、好氧联合培养阶段；

所述第二次复合培养以复合培养基为基础，接入培养复合厌氧种子液及复合好氧种子液制成复合微生物原液。

进一步地，所述第一次复合培养中厌氧联合培养在厌氧种子罐中进行，以糖质培养基加微量元素液、维生素溶液制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接种沼泽红假单胞菌，24小时后接入圆褐固氮菌，培养48小时后接入植物乳杆菌；复合培养36小时后检测，至总菌数达到10.0×10

进一步地，所述复合厌氧种子液中沼泽红假单胞菌、圆褐固氮菌、植物乳杆菌接种比例为：沼泽红假单胞菌：2％～5％；圆褐固氮菌：1％～2％；植物乳杆菌：5％～10％。

进一步地，所述复合厌氧种子液中微量元素液成分(g/L)：FeCl

维生素溶液成分(g/L)：生物素Biotin：0.1,烟酸Niacin：0.35,盐酸硫铵素Thiamine dichloride：0.3,对氨基苯甲酸p-Aminobenzo acid：0.2,泛酸钙Ca-panthothenate：0.1,维生素B

进一步地，所述第一次复合培养中好氧联合培养在厌氧联合培养2天后，在好氧种子罐中，以糖质培养基加无机盐制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至27℃以后，接种白色链霉菌、圆褐固氮菌，培养24小时后，再接入枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌，每分钟40-60转，通氧搅拌培养。复合培养18小时后检测，至总菌数达到10.0×10

进一步地，所述复合好氧种子液中圆褐固氮菌、白色链霉菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌接种比例为：圆褐固氮菌：1％～2％；白色链霉菌：1‰～2‰；枯草芽孢杆菌：1‰～2‰；巨大芽孢杆菌：1‰～2‰。

进一步地，所述第二次复合培养，在发酵罐种，以糖质培养基加1％蛋白胨、1％氯化钠、1％乳糖制成复合培养基，以1N氢氧化钠或盐酸，调节pH值至6.8，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接入培养基总量5％-10％复合厌氧种子液，30-35℃厌氧培养；18小时后，再接入培养基总量1％-5％的复合好氧种子液，通微量氧气，30-33℃兼性厌氧培养；

复合培养48小时以后开始检测，当菌数达到5.0×10

一种防水果裂腐病制剂的复合微生物肥料，以畜禽粪便、秸秆类、酒糟、饼粕为有机物料：900-950公斤，钙镁磷肥(过磷酸钙)50-100公斤，复合微生物菌剂2-4公斤，红糖1-2公斤，将有机物料粉碎，将红糖以300公斤水溶解，加入菌剂，充分混匀，拌入有机物料中，充分混合，压实堆成圆锥形或长条形发酵，可适当覆盖塑料薄膜，一般7天-14天即可。

一种防水果裂腐病制剂的应用，液体菌剂的灌根：4月下旬，果树放叶后，每亩500毫升菌剂，稀释500倍，在果树树盘上开挖20公分深的环状沟，每株浇灌稀释液8-10公斤，菌液下渗后覆土埋实；

液体菌剂的叶面喷洒：开花前7-10天，300倍稀释液喷施；坐果初期，200倍稀释液叶面喷雾5次，前3次间隔20天一次，后2次间隔15天。用量：每亩每次用250毫升菌剂加125克红糖，再加水50公斤制成200倍稀释液。

在果品膨大期禁止使用膨大剂和化学氮肥，增加菌剂喷洒1～2次，所谓秋霖天气喷洒时，应提前2～3天将菌剂加糖质培养基培养增加活菌数量，活菌数浓度越大，既可以提高抗裂性，更能够抑制裂果、腐烂；

复合微生物肥料：亩施用80-160公斤，幼龄果树每株0.5-1公斤，成年树每株2-3公斤，在树盘下挖坑，环状、穴状、坑深20-50公分，深施入土，春季及秋季摘果后施用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、降低土壤pH值，抑制大多数致病菌，制剂中的微生物能提高土壤的生物活性，提高土壤有效养分的含量和果树对铁、钙等元素的吸收和利用率，增加果皮的厚度和韧性。

2、防水果裂腐病微生态制剂中的微生物在生长繁殖过程中能分泌出大量的乳酸等有机酸、抗氧化物质、促生长物质等。直接喷洒到叶面或果实上，一方面会提高叶面的光合作用，刺激果皮生长，厚度和韧性增加，防止果裂；另一方面抑制有害微生物的入侵，防止腐烂。

3、以制剂将有机物料发酵成底肥，结合叶面喷洒施肥，可以提高果树的非特异性免疫功能。果树的抗寒性、抗旱性、抗涝性、抗病性、抗干热风能力都有明显的提高，对果裂的产生也有显著的抑制作用。

4、提高果品的品质，药残少，蛋白质、糖分、干物质含量明显提高，促进早熟，货架寿命长。

附图说明

图1为本发明工艺流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

图1所示，一种防水果裂腐病制剂，该防水果裂腐病制剂按重量百分含量由下述物质组成：圆褐固氮菌1％～5％、白色链霉菌1‰～3‰、枯草芽孢杆菌1‰～5‰、巨大芽孢杆菌1‰～5‰、沼泽红假单胞菌2％～10％、植物乳杆菌2％～15％。

制备方法包括如下步骤：第一次复合培养，第二次复合培养；

所述第一次复合培养分为厌氧联合培养阶段、好氧联合培养阶段；

所述第二次复合培养以复合培养基为基础，接入培养复合厌氧种子液及复合好氧种子液制成复合微生物原液。

所述第一次复合培养中厌氧联合培养在厌氧种子罐中进行，以糖质培养基加微量元素液、维生素溶液制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接种沼泽红假单胞菌，24小时后接入圆褐固氮菌，培养48小时后接入植物乳杆菌；复合培养36小时后检测，至总菌数达到10.0×10

所述复合厌氧种子液中沼泽红假单胞菌、圆褐固氮菌、植物乳杆菌接种比例为：沼泽红假单胞菌：2％～5％；圆褐固氮菌：1％～2％；植物乳杆菌：5％～10％。

所述第一次复合培养中好氧联合培养在厌氧联合培养2天后，在好氧种子罐中，以糖质培养基加无机盐制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至27℃以后，接种白色链霉菌、圆褐固氮菌，培养24小时后，再接入枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌，每分钟40-60转，通氧搅拌培养，复合培养18小时后检测，至总菌数达到10.0×10

所述复合好氧种子液中圆褐固氮菌、白色链霉菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌接种比例为：圆褐固氮菌：1％～2％；白色链霉菌：1‰～2‰；枯草芽孢杆菌：1‰～2‰；巨大芽孢杆菌：1‰～2‰。

所述第二次复合培养，在发酵罐种，以糖质培养基加1％蛋白胨、1％氯化钠、1％乳糖制成复合培养基，以1N氢氧化钠或盐酸，调节pH值至6.8，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接入培养基总量5％-10％复合厌氧种子液，30-35℃厌氧培养；18小时后，再接入培养基总量1％-5％的复合好氧种子液，通微量氧气，30-33℃兼性厌氧培养；

复合培养48小时以后开始检测，当菌数达到5.0×10

一种防水果裂腐病制剂的复合微生物肥料，以畜禽粪便、秸秆类、酒糟、饼粕为有机物料：900-950公斤，钙镁磷肥(过磷酸钙)50-100公斤，复合微生物菌剂2-4公斤，红糖1-2公斤，将有机物料粉碎，将红糖以300公斤水溶解，加入菌剂，充分混匀，拌入有机物料中，充分混合，压实堆成圆锥形或长条形发酵，可适当覆盖塑料薄膜，一般7天-14天即可。

一种防水果裂腐病制剂的应用，液体菌剂的灌根：4月下旬，果树放叶后，每亩500毫升菌剂，稀释500倍，在果树树盘上开挖20公分深的环状沟，每株浇灌稀释液8-10公斤，菌液下渗后覆土埋实；

液体菌剂的叶面喷洒：开花前7-10天，300倍稀释液喷施；坐果初期，200倍稀释液叶面喷雾5次，前3次间隔20天一次，后2次间隔15天，用量：每亩每次用250毫升菌剂加125克红糖，再加水50公斤制成200倍稀释液；

在果品膨大期禁止使用膨大剂和化学氮肥，增加菌剂喷洒1～2次，所谓秋霖天气喷洒时，应提前2～3天将菌剂加糖质培养基培养增加活菌数量，活菌数浓度越大，既可以提高抗裂性，更能够抑制裂果、腐烂；

复合微生物肥料：亩施用80-160公斤，幼龄果树每株0.5-1公斤，成年树每株2-3公斤，在树盘下挖坑，环状、穴状、坑深20-50公分，深施入土，春季及秋季摘果后施用。

本发明技术方案包括三个部分：

1)筛选并培养复合微生物制剂，2)以制得的微生物制剂发酵有机质，制成复合微生物菌肥；3)果树栽培中液体制剂的灌根、喷洒；固体菌肥施加：

菌株的筛选与组合培养

菌株筛选的范围要求是：必须是自然界存在的、必须是中国农田土壤自然状态的、对植物有促进作用的、能互利共生或至少不相互拮抗的、能适应酸性条件、培养条件相对简单、活性好、对环境友好、安全可靠的微生物。

从符合以上要求、且经农业部允许用于微生物肥料的菌种目录中，筛选出近300个复合方案，经长期复合培养后优选出形状稳定、效果显著的组合菌株：植物乳杆菌、圆褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、白色链霉菌、沼泽红假单胞菌、巨大芽孢杆菌。

该菌群结构设计思路：主要功能菌占绝对数量优势，由其确定制剂的主要性状稳定；辅助功能菌在制备及应用的不同阶段起不同的作用。

该制剂的制备方法如下：

1、单菌株的优化复壮及常规培养：

①植物乳杆菌；

植物乳杆菌接种至液体培养基，于培养箱内，33-35℃静置培养1-2天，至菌数达到2.0×10

培养基配方为：酪蛋白胨10g,牛肉膏10g,酵母膏5g,葡萄糖5g,乙酸钠5g,柠檬酸二铵2g,Tween801g,K

②圆褐固氮菌；

圆褐固氮菌接种至液体培养基，于振荡培养箱内，25-30℃培养3-5天；至菌数达到2.0×10

培养基配方：KH

③枯草芽孢杆菌；

枯草芽孢杆菌接种至液体培养基，于振荡培养箱内，25-27℃培养1天，至菌数达到2.0×10

培养基配方：牛肉膏3～5g,蛋白胨10g,NaCl5g,自来水1000ml,pH7.2～7.4,做法：先称蛋白胨、NaCl于烧杯中，加2/3蒸馏水，牛肉膏于另一杯中称量，加少量水加热，倒入前杯中加热。降温后补足水量调pH值。121℃20′灭菌。

④白色链霉菌

白色链霉菌接种至液体培养基，于振荡培养箱内，25-30℃培养3-5天；至菌数达到2.0×10

培养基配方为：NaCl0.5g,KNO

⑤沼泽红假单胞菌

沼泽红假单胞菌接种至液体培养基，于光照培养箱内，35-37℃培养5-7天，至菌数至少达到2.0×10

液体培养基配方为:蛋白胨3g,酵母膏3g,MgSO

⑥巨大芽孢杆菌；

巨大芽孢杆菌接种至液体培养基，于振荡培养箱内，25-27℃培养1天，至菌数达到2.0×10

2、第一次复合培养：

厌氧联合培养：在厌氧种子罐中，以糖质培养基加微量元素液、维生素溶液制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接种沼泽红假单胞菌，24小时后接入圆褐固氮菌，培养48小时后接入植物乳杆菌；复合培养36小时后检测，至总菌数达到10.0×10

接种比例：沼泽红假单胞菌：2％～5％；圆褐固氮菌：1％～2％；植物乳杆菌：5％～10％；

微量元素液成分(g/L)：FeCl

维生素溶液成分(g/L)：生物素Biotin：0.1,烟酸Niacin：0.35,盐酸硫铵素Thiamine dichloride：0.3,对氨基苯甲酸p-Aminobenzo acid：0.2,泛酸钙Ca-panthothenate：0.1,维生素B

好氧联合培养：在厌氧联合培养2天后，在好氧种子罐中，以糖质培养基加无机盐制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至27℃以后，接种白色链霉菌、圆褐固氮菌，培养24小时后，再接入枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。每分钟40-60转，通氧搅拌培养。复合培养18小时后检测，至总菌数达到10.0×10

接种比例：圆褐固氮菌：1％～2％；白色链霉菌：1‰～2‰；枯草芽孢杆菌：1‰～2‰；巨大芽孢杆菌：1‰～2‰。

3、第二次复合培养：

在发酵罐种，以糖质培养基加1％蛋白胨、1％氯化钠、1％乳糖制成复合培养基，以1N氢氧化钠或盐酸，调节pH值至6.8，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接入培养基总量5％-10％复合厌氧种子液，30-35℃厌氧培养；18小时后，再接入培养基总量1％-5％的复合好氧种子液，通微量氧气，30-33℃兼性厌氧培养。

复合培养48小时以后开始检测，当菌数达到5.0×10

4抗水果裂腐病微生态制剂产品质量标准：

颜色：液体呈半透明红棕色；

气味：发酵型酸味；

pH：3.5～4.0

总菌数：≥2×10

菌种组成兼顾外在功能性与内在共生性，生产工艺经多年实践验证可靠有效，产品质量稳定，两年内产品的感官指标、pH值不会发生变化，总菌数≥2×10

制备复合微生物肥料

原料：畜禽粪便、秸秆类、酒糟、饼粕等。

有机物料：900-950公斤，钙镁磷肥(过磷酸钙)50-100公斤，复合微生物菌剂2-4公斤，红糖1-2公斤。

制作方法：将有机物料粉碎，将红糖以300公斤水溶解，加入菌剂，充分混匀，拌入有机物料中，充分混合，压实堆成圆锥形或长条形发酵，可适当覆盖塑料薄膜，一般7天-14天即可。

除按农业部要求使用畜禽粪便、秸秆等有机原材料外，特别添加10％的钙镁磷肥，以增加果树对钙磷的吸收。

具体实施例一：

第一次复合培养：

厌氧联合培养：在厌氧种子罐中，以糖质培养基加微量元素液、维生素溶液制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接种沼泽红假单胞菌，24小时后接入圆褐固氮菌，培养48小时后接入植物乳杆菌；复合培养36小时后检测，至总菌数达到10.0×10

接种比例：沼泽红假单胞菌：2％；圆褐固氮菌：1％；植物乳杆菌：5％；

微量元素液成分(g/L)：FeCl

维生素溶液成分(g/L)：生物素Biotin：0.1,烟酸Niacin：0.35,盐酸硫铵素Thiamine dichloride：0.3,对氨基苯甲酸p-Aminobenzo acid：0.2,泛酸钙Ca-panthothenate：0.1,维生素B

好氧联合培养：在厌氧联合培养2天后，在好氧种子罐中，以糖质培养基加无机盐制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至27℃以后，接种白色链霉菌、圆褐固氮菌，培养24小时后，再接入枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。每分钟40转，通氧搅拌培养。复合培养18小时后检测，至总菌数达到10.0×10

接种比例：圆褐固氮菌：1％；白色链霉菌：1‰；枯草芽孢杆菌：1‰；巨大芽孢杆菌：1‰。

第二次复合培养：

在发酵罐种，以糖质培养基加1％蛋白胨、1％氯化钠、1％乳糖制成复合培养基，以1N氢氧化钠或盐酸，调节pH值至6.8，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接入培养基总量5％复合厌氧种子液，30℃厌氧培养；18小时后，再接入培养基总量1％的复合好氧种子液，通微量氧气，32℃兼性厌氧培养。

复合培养48小时以后开始检测，当菌数达到5.0×10

制备复合微生物肥料

以畜禽粪便、秸秆类、酒糟、饼粕为有机物料：900公斤，钙镁磷肥(过磷酸钙)50公斤，复合微生物菌剂2公斤，红糖1公斤；将有机物料粉碎，将红糖以300公斤水溶解，加入菌剂，充分混匀，拌入有机物料中，充分混合，压实堆成圆锥形或长条形发酵，可适当覆盖塑料薄膜，7天即可。

特别添加的钙镁磷肥，以增加果树对钙磷的吸收。

复合微生物肥料：亩施用80公斤，幼龄果树每株0.5公斤，成年树每株2公斤，在树盘下挖坑，环状、穴状、坑深20公分，深施入土，春季及秋季摘果后施用。

液体菌剂的叶面喷洒：开花前7-10天，300倍稀释液喷施；坐果初期，200倍稀释液叶面喷雾5次，前3次间隔20天一次，后2次间隔15天，用量：每亩每次用250毫升菌剂加125克红糖，再加水50公斤制成200倍稀释液；

具体实施例二：

第一次复合培养：

厌氧联合培养：在厌氧种子罐中，以糖质培养基加微量元素液、维生素溶液制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接种沼泽红假单胞菌，24小时后接入圆褐固氮菌，培养48小时后接入植物乳杆菌；复合培养36小时后检测，至总菌数达到10.0×10

接种比例：沼泽红假单胞菌：3％；圆褐固氮菌：2％；植物乳杆菌：7％；

微量元素液成分(g/L)：FeCl

维生素溶液成分(g/L)：生物素Biotin：0.1,烟酸Niacin：0.35,盐酸硫铵素Thiamine dichloride：0.3,对氨基苯甲酸p-Aminobenzo acid：0.2,泛酸钙Ca-panthothenate：0.1,维生素B

好氧联合培养：在厌氧联合培养2天后，在好氧种子罐中，以糖质培养基加无机盐制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至27℃以后，接种白色链霉菌、圆褐固氮菌，培养24小时后，再接入枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。每分钟50转，通氧搅拌培养。复合培养18小时后检测，至总菌数达到10.0×10

接种比例：圆褐固氮菌：2％；白色链霉菌：2‰；枯草芽孢杆菌：2‰；巨大芽孢杆菌：2‰。

第二次复合培养：

在发酵罐种，以糖质培养基加1％蛋白胨、1％氯化钠、1％乳糖制成复合培养基，以1N氢氧化钠或盐酸，调节pH值至6.8，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接入培养基总量5％复合厌氧种子液，33℃厌氧培养；18小时后，再接入培养基总量3％的复合好氧种子液，通微量氧气，30℃兼性厌氧培养。

复合培养48小时以后开始检测，当菌数达到5.0×10

制备复合微生物肥料

以畜禽粪便、秸秆类、酒糟、饼粕为有机物料：950公斤，钙镁磷肥(过磷酸钙)80公斤，复合微生物菌剂3公斤，红糖1公斤；将有机物料粉碎，将红糖以300公斤水溶解，加入菌剂，充分混匀，拌入有机物料中，充分混合，压实堆成圆锥形或长条形发酵，可适当覆盖塑料薄膜，14天即可。

特别添加的钙镁磷肥，以增加果树对钙磷的吸收。

复合微生物肥料：亩施用80-160公斤，幼龄果树每株0.5-1公斤，成年树每株2-3公斤，在树盘下挖坑，环状、穴状、坑深30公分，深施入土，春季及秋季摘果后施用。

液体菌剂的叶面喷洒：开花前7-10天，300倍稀释液喷施；坐果初期，200倍稀释液叶面喷雾5次，前3次间隔20天一次，后2次间隔15天，用量：每亩每次用250毫升菌剂加125克红糖，再加水50公斤制成200倍稀释液；

具体实施例三：

第一次复合培养：

厌氧联合培养：在厌氧种子罐中，以糖质培养基加微量元素液、维生素溶液制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接种沼泽红假单胞菌，24小时后接入圆褐固氮菌，培养48小时后接入植物乳杆菌；复合培养36小时后检测，至总菌数达到10.0×10

接种比例：沼泽红假单胞菌：5％；圆褐固氮菌：2％；植物乳杆菌：10％；

微量元素液成分(g/L)：FeCl

维生素溶液成分(g/L)：生物素Biotin：0.1,烟酸Niacin：0.35,盐酸硫铵素Thiamine dichloride：0.3,对氨基苯甲酸p-Aminobenzo acid：0.2,泛酸钙Ca-panthothenate：0.1,维生素B

好氧联合培养：在厌氧联合培养2天后，在好氧种子罐中，以糖质培养基加无机盐制成复合培养基，95℃灭菌1小时，冷却至27℃以后，接种白色链霉菌、圆褐固氮菌，培养24小时后，再接入枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。每分钟60转，通氧搅拌培养。复合培养18小时后检测，至总菌数达到10.0×10

接种比例：圆褐固氮菌：1％；白色链霉菌：2‰；枯草芽孢杆菌：2‰；巨大芽孢杆菌：1‰。

第二次复合培养：

在发酵罐种，以糖质培养基加1％蛋白胨、1％氯化钠、1％乳糖制成复合培养基，以1N氢氧化钠或盐酸，调节pH值至6.8，95℃灭菌1小时，冷却至30℃以后，按顺序先接入培养基总量10％复合厌氧种子液，35℃厌氧培养；18小时后，再接入培养基总量5％的复合好氧种子液，通微量氧气，33℃兼性厌氧培养。

复合培养48小时以后开始检测，当菌数达到5.0×10

制备复合微生物肥料

以畜禽粪便、秸秆类、酒糟、饼粕为有机物料：950公斤，钙镁磷肥(过磷酸钙)100公斤，复合微生物菌剂4公斤，红糖2公斤；将有机物料粉碎，将红糖以300公斤水溶解，加入菌剂，充分混匀，拌入有机物料中，充分混合，压实堆成圆锥形或长条形发酵，可适当覆盖塑料薄膜，10天即可。

特别添加的钙镁磷肥，以增加果树对钙磷的吸收。

复合微生物肥料：亩施用160公斤，幼龄果树每株1公斤，成年树每株3公斤，在树盘下挖坑，环状、穴状、坑深50公分，深施入土，春季及秋季摘果后施用。

液体菌剂的叶面喷洒：开花前7-10天，300倍稀释液喷施；坐果初期，200倍稀释液叶面喷雾5次，前3次间隔20天一次，后2次间隔15天，用量：每亩每次用250毫升菌剂加125克红糖，再加水50公斤制成200倍稀释液；

本发明生产的防水果裂腐病微生态制剂能有效的改善土壤养分的均衡供应，通过微生物产生的各种植物激素、微量元素等协调果皮和果肉的生产速度，果皮相对较厚而韧性强，果肉干物质含量高，不易开裂。即使到后期产生裂果，由于本产品有很强的抑制霉菌等有害菌的作用，也不易腐烂。

在我国的大枣产地陕西榆林市进行的应用实践表明：防水果裂腐病微生态制剂与有机肥、大枣专用复合肥配合使用，或单独灌根、叶面喷洒，都能明显地降低裂果率，基本不受天气条件的影响。

在陕西省府谷县，2008年秋季5天连阴雨，13个试点使用防水果裂腐病微生态制剂的平均裂果率比对照减少46.5％；其中，以0.2％菌液连续灌根2年的裂果率只有9％，比对照降低76.6％，增产28％以上。2007年秋季连续15个阴雨天(60年不遇)，13个试点的平均裂果率为44.8％，比对照的61.8％减少27.3％；其中以0.1％菌液灌根+0.2％菌液喷洒叶面处理的裂果率为24.7％，比对照减少60％。在木枣示范园50亩水浇地，以0.2％菌液灌根1次+0.4％菌液叶面喷洒5次，连续阴雨11天(10月6日)仍无裂果。从10月7日起才开始出现裂果，10月10日裂果率虽很快达到95％，但只裂不烂，有效地抑制了裂腐病的发生，增产增收。

多点试用结果的结论是：抗御10天以上的秋霖；减少裂果率75％以上；增产28％～55％以上。

榆林市科技局鉴定评价为：防水果裂腐病微生物菌剂(商品原名为GHEM)防治红枣裂果方面达到国内领先水平，建议在枣区大面积推广应用。

在陕西合阳，樱桃、葡萄、甜瓜等品种的种植对比试验中，采用0.1％菌液灌根+0.2％菌液喷洒叶面处理，平均可以降低30％以上的裂果。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。