对于生产和用于注射装置中是最佳的含有丙二醇的肽制剂

摘要

本发明涉及含有肽和丙二醇的药物制剂，涉及制备该制剂的方法，以及涉及该制剂在治疗疾病和病症中的用途，为此该制剂中所含肽的用途得到表明。本发明进一步涉及减少肽制剂对注射装置的阻塞的方法和减少肽制剂生产过程中生产设备上沉积物的方法。

说明书

本申请是申请日为2004年11月18日、发明名称为“对于生产和用于注射装置中是最佳的含有丙二醇的肽制剂”的中国发明专利申请No.201510078513.9的分案申请。

技术领域

本发明涉及包括肽和丙二醇的药物制剂，涉及制备该制剂的方法，以及涉及该制剂在治疗疾病和病症中的用途，为此该制剂中所含肽的用途得到表明。本发明进一步涉及减少肽制剂对注射装置的阻塞的方法和减少生产肽制剂过程中生产设备上沉积物的方法。

背景技术

含有肽的药物制剂中包含等渗剂是公知的，这样制剂中所用的较常见等渗剂之一是甘露醇。然而，本发明者观察到甘露醇在生产肽制剂过程中引起了问题，因为其结晶导致生产设备和成品中的沉积物。这样的沉积物增加了生产制剂过程中清洗装填设备的需要，且这导致了降低的生产能力。此外，这样的沉积物还导致了降低的成品产量，因为含有肽制剂的小瓶/药筒如果存在颗粒就需要废弃。最后，本发明者观察到在通过注射给药的肽制剂中，甘露醇的存在导致注射装置的阻塞。

因此，需要鉴定甘露醇的替代等渗剂，用于包含于含有肽的制剂中，尤其是用于包含于通过注射给药的肽制剂中。

发明内容

本发明者发现含有一定浓度丙二醇的肽制剂呈现出生产设备和成品中减少的沉积物，还呈现出注射装置减少的阻塞。本发明的组合物可以与任何肽配制，并且还是物理和化学稳定的，因此使得它们耐存储并适于入侵方式的给药(例如，注射，皮下注射，肌内，静脉内或灌输)以及非入侵方式的给药。

因此本发明涉及包含肽和丙二醇的药物制剂，其中丙二醇的存在浓度为1-100mg/ml，制剂的pH为7-10。在优选实施方案中，本发明的药物制剂进一步含有缓冲剂和防腐剂。

本发明还涉及制备本发明药物制剂的方法。

在一个实施方案中，制备肽制剂的方法包括：

a)将防腐剂、丙二醇和缓冲剂溶解于水中制得第一种溶液；

b)将肽溶解于水中制得第二种溶液；

c)将第一种和第二种溶液混合；和

d)将c)中混合物的pH调节至所需的pH。

在另一个实施方案中，制备肽制剂的方法包括：

a)将防腐剂和缓冲剂溶解于水中制得第一种溶液；

b)将丙二醇加入第一种溶液中；

c)将第一种溶液与含有溶解于水中的肽的第二种溶液混合；和

d)将c)中混合物的pH调节至所需的pH。

在再一个实施方案中，制备肽制剂的方法包括：

a)将防腐剂、缓冲剂和丙二醇溶解于水中制得溶液；

b)将肽加入步骤a)的溶液中；和

c)将步骤b)溶液的pH调节至所需的pH。

本发明进一步涉及使用本发明药物制剂的治疗方法，其中给予有效量的组合物来抗击疾病、病症或障碍，为此制剂中所含肽的给药得到表明。

此外，本发明还涉及减少生产肽制剂过程中生产设备上沉积物的方法，其中该方法包括用浓度为1-100mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在一个实施方案中，通过模拟装填实验来测量含有丙二醇的制剂在生产过程中生产设备上的沉积物相对于含有之前所用等渗剂的制剂所观察到的沉积物的减少。

本发明还涉及减少生产肽制剂过程中成品中沉积物的方法，其中该方法包括用浓度为1-100mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在一个实施方案中，通过含有丙二醇制剂的小瓶和/或药筒由于沉积物必须废弃的数目相对于含有之前所用等渗剂制剂的小瓶和/或药筒由于沉积物必须废弃的数目的减少来测量成品中沉积物的减少。

本发明进一步涉及减少肽制剂对注射装置的阻塞的方法，其中该方法包括用浓度为1-100mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在一个实施方案中，在模拟使用研究中测量含有丙二醇制剂对注射装置的阻塞相对于含有之前所用等渗剂制剂观察到的阻塞的减少。

附图说明

图1显示了显微镜载玻片上干燥液滴的照片，从左至右为不含有等渗剂的安慰剂(无肽)制剂(即，只有水，防腐剂和缓冲剂)，作为等渗剂的甘露醇，山梨糖醇，木塘醇，蔗糖或甘油，最右边的载玻片含有甘露醇和肽Arg

图2显示了光学显微镜的照片，从左至右为含有甘露醇、精氨酸、肌醇或甘油作为等渗剂的安慰剂制剂的一些干燥的液滴。

图3显示了给药含有肌醇、麦芽糖或甘油作为等渗剂的安慰剂制剂阻塞的针的光学显微镜照片。

图4显示了用含有甘氨酸、乳糖或甘露醇作为等渗剂的安慰剂制剂给药的针上沉积物的光学显微镜照片。

图5显示了模拟装填含有肌醇的Arg

图6显示了模拟装填含有甘露醇的安慰剂制剂24小时后装填设备上的沉积物。

图7显示了用含有甘露醇(上图)和丙二醇(下图)的Arg

发明详述

本发明涉及含有肽或肽混合物和丙二醇的药物制剂，其中制剂中丙二醇的终浓度为1-100mg/ml，制剂的pH为7-10。

发现本发明的药物制剂对于生产是最佳的，因为它们相对于含有其他等渗剂的制剂呈现出生产设备中减少的沉积物，如通过实施例中所述的模拟装填研究所测量的。此外，发现本发明的药物制剂对于用于注射装置中是最佳的，因为它们相对于含有其他等渗剂的制剂呈现出注射装置减少的阻塞，如通过实施例中所述的模拟使用研究所测量的。

本发明的制剂可以与任何肽一起配制，其中这样肽的实例包括但不限于，胰高血糖素、人生长激素(hGH)、胰岛素、抑肽酶、因子VII、组织血纤维蛋白酶原激活蛋白(TPA)、因子VIIa、FFR-因子VIIa、肝素酶、ACTH、肝素结合蛋白、促肾上腺皮质激素释放因子、血管紧张素、降钙素、胰高血糖素样肽-1、胰高血糖素样肽-2、胰岛素样生长因子-1、胰岛素样生长因子-2、成纤维细胞生长因子、胃抑制肽、生长激素释放因子、垂体腺苷酸环化酶激活肽、分泌素、肠胃泌素(enterogastrin)、生长激素释放抑制因子、甲状旁腺激素、血栓形成素、促红细胞生成素、下丘脑释放因子、促乳素、甲状腺刺激激素、内啡肽、脑啡肽、加压素、催产素、阿片样物质、DPP IV、白细胞介素、免疫球蛋白、补体抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制剂、细胞因子、细胞因子受体、PDGF、肿瘤坏死因子、肿瘤坏死因子受体、生长因子及其类似物和衍生物，这些肽中的每一种构成本发明的替代实施方案。

在本申请中，名称“类似物”用于表示这样的肽，其中母体肽的一个或多个氨基酸残基已经被其他氨基酸残基取代和/或其中母体肽的一个或多个氨基酸残基已经缺失和/或其中已经将一个或多个氨基酸残基添加至母体肽。这样的添加可以发生在母体肽的N-末端或C-末端或两端。通常“类似物”是这样的肽，其中母体肽的6个或更少的氨基酸已经被取代和/或添加和/或缺失，更优选是这样的肽，其中母体肽的3个或更少的氨基酸已经被取代和/或添加和/或缺失，最优选是这样的肽，其中母体肽的一个氨基酸已经被取代和/或添加和/或缺失。

在本申请中，“衍生物”用于表示肽或其类似物，其是通过在肽或其类似物的一个或多个氨基酸残基上引入有机取代基例如酯、烷基或亲脂性官能度来化学修饰的。

在一个实施方案中，本发明制剂中包括的肽是GLP-1促效药，其中应理解“GLP-1促效药”指的是完全或部分激活人GLP-1受体的任何肽。在优选实施方案中，“GLP-1促效药”是结合于GLP-1受体的任何肽，优选具有亲和常数(K

鉴定GLP-1促效药的方法描述于WO 93/19175中(Novo Nordisk A/S)并且根据本发明可以使用的合适的GLP-1类似物和衍生物的实例包括WO 99/43705(Novo Nordisk A/S)，WO 99/43706(Novo Nordisk A/S)，WO 99/43707(Novo Nordisk A/S)，WO 98/08871(具有亲脂性取代基的类似物)和WO 02/46227(与血清白蛋白或与Ig的Fc部分融合的类似物)(Novo Nordisk A/S)，WO 99/43708(Novo Nordisk A/S)，WO 99/43341(Novo Nordisk A/S)，WO 87/06941(The General Hospital Corporation)，WO 90/11296(The GeneralHospital Corporation)，WO 91/11457(Buckley等)，WO 98/43658(Eli Lilly&Co.)，EP0708179-A2(EliLilly&Co.)，EP 0699686-A2(EliLilly&Co.)，WO 01/98331(Eli Lilly&Co.)中所提及的那些。

在一个实施方案中，GLP-1促效药选自GLP-1(7-36)-酰胺，GLP-1(7-37)，GLP-1(7-36)-酰胺类似物，GLP-1(7-37)类似物，或这些中任一种的衍生物。

在一个实施方案中，GLP-1促效药是GLP-1(7-36)-酰胺、GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36)-酰胺类似物或GLP-1(7-37)类似物的衍生物，其包含亲脂性取代基。

在本发明的这个实施方案中，GLP-1衍生物优选具有三个连接于母体肽(即，GLP-1(7-36)-酰胺，GLP-1(7-37)，GLP-1(7-36)-酰胺类似物或GLP-1(7-37)类似物)的亲脂性取代基，更优选两个亲脂性取代基，且最优选一个亲脂性取代基，其中每个亲脂性取代基优选具有4-40个碳原子，更优选8-30个碳原子，更优选8-25个碳原子，更优选12-25个碳原子，最优选14-18个碳原子。

在一个实施方案中，亲脂性取代基包含部分或全部氢化的环戊菲骨架。

在另一个实施方案中，亲脂性取代基是直链或支链烷基。

在再一个实施方案中，亲脂性取代基是直链或支链脂肪酸的酰基。优选，亲脂性取代基是具有通式CH

在本发明进一步的实施方案中，亲脂性取代基具有带负电荷的基团如羧酸基团。例如，亲脂性取代基可以是通式HOOC(CH

在本发明的GLP-1衍生物中，亲脂性取代基含有官能团，其可以连接于以下母体GLP-1肽的氨基酸的官能团中的一个：

(a)连接于N-末端氨基酸α-碳上的氨基，

(b)连接于C-末端氨基酸α-碳上的羧基，

(c)任何Lys残基的ε-氨基，

(d)任何Asp和Glu残基R基团的羧基，

(e)任何Tyr，Ser和Thr残基R基团的羟基，

(f)任何Trp，Asn，Gln，Arg和His残基R基团的氨基，或

(g)任何Cys残基R基团的硫羟基。

在一个实施方案中，亲脂性取代基连接任何Asp和Glu残基R基团的羧基。

在另一个实施方案中，亲脂性取代基与连接于C-末端氨基酸α-碳上的羧基连接。

在最优选的实施方案中，亲脂性取代基连接于任何Lys残基的ε-氨基。

在本发明的优选实施方案中，亲脂性取代基通过间隔基连接于母体GLP-1肽。间隔基必须含有至少两个官能团，一个连接于亲脂性取代基的官能团，另一个连接于母体GLP-1肽的官能团。

在一个实施方案中，间隔基是除了Cys或Met以外的氨基酸残基或二肽如Gly-Lys。为了本发明的目的，措词“二肽如Gly-Lys”意思是除了Cys或Met以外的两个氨基酸的任意组合，优选这样的二肽，其中C-末端氨基酸残基是Lys，His或Trp，优选Lys，而N-末端氨基酸残基是Ala，Arg，Asp，Asn，Gly，Glu，Gln，Ile，Leu，Val，Phe，Pro，Ser，Tyr，Thr，Lys，His和Trp。优选，母体肽的氨基与氨基酸残基或二肽间隔基的羧基形成酰胺键，而氨基酸残基或二肽间隔基的氨基与亲脂性取代基的羧基形成酰胺键。

优选的间隔基是赖氨酰、谷氨酰、天冬氨酰、甘氨酰、β-丙氨酰、γ-氨基丁酰基，其中每个构成独立的实施方案。最优选的间隔基是谷氨酰和β-丙氨酰。当间隔基是Lys，Glu或Asp时，其羧基可以与氨基酸残基的氨基形成酰胺键，而其氨基可以与亲脂性取代基的羧基形成酰胺键。当Lys用作间隔基时，在一些情况中可以在Lys的ε-氨基和亲脂性取代基之间插入再一个间隔基。在一个实施方案中，这样的再一个间隔基是琥珀酸，其与Lys的ε-氨基以及与亲脂性取代基中存在的氨基形成酰胺键。在另一个实施方案中，这样的再一个间隔基是Glu或Asp，其与Lys的ε-氨基形成酰胺键以及与亲脂性取代基中存在的羧基形成另一个酰胺键，即，亲脂性取代基是N

在另一个实施方案中，间隔基是具有1至7个亚甲基的直链烷烃α,ω-二羧酸基团，该间隔基在母体肽的氨基和亲脂性取代基的氨基之间形成桥接。优选，间隔基是琥珀酸。

在进一步的实施方案中，带有连接间隔基的亲脂性取代基是通式CH

在进一步的实施方案中，带有连接间隔基的亲脂性取代基是通式CH

在进一步的实施方案中，带有连接间隔基的亲脂性取代基是通式CH

在进一步的实施方案中，亲脂性取代基是通式COOH(CH

在进一步的实施方案中，带有连接间隔基的亲脂性取代基是通式-NHCH(COOH)(CH

在进一步的实施方案中，带有连接间隔基的亲脂性取代基是通式CH

在进一步的实施方案中，带有连接间隔基的亲脂性取代基是通式-NHCH(COOH)(CH

在进一步的实施方案中，带有连接间隔基的亲脂性取代基是通式-NHCH(COOH)(CH

在再一个实施方案中，GLP-1促效药是Arg

在再一个实施方案中，GLP-1促效药选自Gly

在再一个实施方案中，GLP-1促效药选自Arg

在再一个实施方案中，GLP-1促效药选自Val

在再一个实施方案中，GLP-1促效药是exendin-4或exendin-3，exendin-4或exendin-3的类似物或这些中任一种的衍生物。

本发明中包括的exendin及其类似物、衍生物和片段的实例是WO97/46584、US 5,424,286和WO 01/04156中公开的那些。US 5,424,286描述了用exendin多肽刺激胰岛素释放的方法。公开的exendin多肽包括HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGX；其中X＝P或Y，和HX1X2GTFITSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS；其中X1X2＝SD(exendin-3)或GE(exendin-4)。WO 97/46584描述了exendin肽截短的形式。公开的肽提高了胰岛素的分泌和生物合成，但是减少了胰高血糖素的分泌和生物合成。WO 01/04156描述了exendin-4类似物和衍生物以及这些分子的制备。WO 02/46227中公开了通过与血清白蛋白或Ig的Fc部分融合稳定的exendin-4类似物。

在一个实施方案中，exendin-4类似物是HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-酰胺。

当本发明制剂中包括的肽是GLP-1促效药时，GLP-1促效药存在的浓度为约0.1mg/ml至约100mg/ml，更优选的浓度为约0.1mg/ml至约50mg/ml，最优选的浓度为约0.1mg/ml至约10mg/ml。

在另一个实施方案中，本发明制剂中包括的肽是胰岛素，其中应理解“胰岛素”指的是人胰岛素，[其中“人胰岛素”指的是具有DSHW Nicol和LF Smith:

在一个实施方案中，胰岛素是人胰岛素或人胰岛素类似物的衍生物，其中该衍生物含有至少一个赖氨酸残基和连接于赖氨酸残基ε-氨基上的亲脂性取代基。

在一个实施方案中，亲脂性取代基连接的赖氨酸残基位于胰岛素肽的B28位置。

在替代实施方案中，亲脂性取代基连接的赖氨酸残基位于胰岛素肽的B29位置。

在再一个实施方案中，亲脂性取代基是对应于具有至少6个碳原子羧酸的酰基。

在另一优选的实施方案中，亲脂性取代基是酰基，支链或直链，其对应于具有8至24个原子长的碳原子链的羧酸。

在另一优选实施方案中，亲脂性取代基是对应于具有至少6个碳原子的脂肪酸的酰基。

在另一优选实施方案中，亲脂性取代基是对应于具有6至24个碳原子的直链饱和羧酸的酰基。

在另一优选实施方案中，亲脂性取代基是对应于具有8至12个碳原子的直链饱和羧酸的酰基。

在另一优选实施方案中，亲脂性取代基是对应于具有10至16个碳原子的直链饱和羧酸的酰基。

在另一优选实施方案中，亲脂性取代基是寡氧乙烯基，含有至多10个，优选至多5个氧乙烯单元。

在另一优选实施方案中，亲脂性取代基是寡氧丙烯基，含有至多10个，优选至多5个氧丙烯单元。

在一个优选实施方案中，本发明涉及人胰岛素衍生物，其中B30氨基酸残基缺失或是可以由遗传密码编码的任何氨基酸残基，除了Lys，Arg和Cys；A21和B3氨基酸残基独立地是可以由遗传密码编码的任何氨基酸残基，除了Lys，Arg和Cys；Phe

在另一优选实施方案中，本发明涉及人胰岛素衍生物，其中B30氨基酸残基缺失或是可以由遗传密码编码的任何氨基酸残基，除了Lys，Arg和Cys；A21和B3氨基酸残基独立地是可以由遗传密码编码的任何氨基酸残基，除了Lys，Arg和Cys，附带条件是如果B30氨基酸残基是Ala或Thr，那么残基A21和B3中至少一个不同于Asn；Phe

在另一优选实施方案中，本发明涉及人胰岛素衍生物，其中B30氨基酸残基缺失或是可以由遗传密码编码的任何氨基酸残基，除了Lys，Arg和Cys；A21和B3氨基酸残基独立地是可以由遗传密码编码的任何氨基酸残基，除了Lys，Arg和Cys；Phe

当本发明制剂中包括的肽是胰岛素时，胰岛素存在的浓度为约0.5mg/ml至约20mg/ml，更优选浓度为约1mg/ml至约15mg/ml。

在另一个实施方案中，本发明制剂中包括的肽是hGH或Met-hGH。

当本发明制剂中包括的肽是hGH或Met-hGH时，hGH或Met-hGH存在的浓度为约0.5mg/ml至约50mg/ml，更优选浓度为约1mg/ml至约10mg/ml。

在再一个实施方案中，本发明制剂中包括的肽是GLP-2或其类似物或衍生物。

当本发明制剂中包括的肽是GLP-2或其类似物或衍生物时，GLP-2或其类似物或衍生物存在的浓度为约1mg/ml至约100mg/ml，更优选浓度为约1mg/ml至约10mg/ml。

在再一个实施方案中，本发明制剂中包括的肽是因子VII或因子VIIa或其类似物或衍生物。

当本发明制剂中包括的肽是因子VII或因子VIIa或其类似物或衍生物时，因子VII或因子VIIa或其类似物或衍生物存在的浓度为约0.1mg/ml至约10mg/ml，更优选浓度为约0.5mg/ml至约5mg/ml。

在一个实施方案中，本发明制剂中丙二醇的终浓度为约1至约50mg/ml。

在另一个实施方案中，本发明制剂中丙二醇的终浓度为约5至约25mg/ml。

在再一个实施方案中，本发明制剂中丙二醇的终浓度为约8至约16mg/ml。

在再一个实施方案中，本发明制剂中丙二醇的终浓度为约13至约15mg/ml。

在再一个实施方案中，本发明制剂中丙二醇的终浓度为约13.5至约14.5mg/ml。

在本发明另一个实施方案中，制剂具有约7.0至约9.5的pH，其中关于pH使用的术语“约”的意思是从所述数字+或-0.1个pH单位。

在本发明进一步的实施方案中，制剂具有约7.0至约8.0的pH。

在本发明再进一步的实施方案中，制剂具有约7.2至约8.0的pH。

本发明在进一步的实施方案中，制剂具有约7.0至约8.3的pH。

本发明再进一步的实施方案中，制剂具有约7.3至约8.3的pH。

在本发明的优选实施方案中，除了肽和丙二醇以外，制剂还含有缓冲剂和/或防腐剂。

当本发明的制剂中要包括缓冲剂时，该缓冲剂选自醋酸钠、碳酸钠、柠檬酸盐、甘氨酰甘氨酸、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠，和三(羟甲基)-氨基甲烷，或其混合物。这些特定缓冲剂中的每一种构成本发明的替代实施方案。在本发明的优选实施方案中，缓冲剂是甘氨酰甘氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠或其混合物。

当本发明的制剂中要包括药物学上可接受的防腐剂时，该防腐剂选自苯酚、间-甲酚、对-羟基苯甲酸甲酯、对-羟基苯甲酸丙酯、2-苯氧乙醇、对-羟基苯甲酸丁酯、2-苯乙醇、苯甲醇、氯代丁醇和硫柳汞或其混合物。这些特定防腐剂中的每一种构成本发明的替代实施方案。在本发明的优选实施方案中，防腐剂是苯酚或间-甲酚。

在本发明进一步的实施方案中，防腐剂存在的浓度为约0.1mg/ml至约50mg/ml，更优选浓度为约0.1mg/ml至约25mg/ml，最优选浓度为约0.1mg/ml至约10mg/ml。

在药物组合物中使用防腐剂是本领域技术人员公知的。为了方便，参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。

在本发明进一步的实施方案中，制剂可以进一步包含螯合剂，其中螯合剂可以选自乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸和天冬氨酸的盐，及其混合物。这些特定螯合剂中的每一种构成本发明的替代实施方案。

在本发明进一步的实施方案中，螯合剂的存在浓度为0.1mg/ml至5mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，螯合剂存在的浓度为约0.1mg/ml至2mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，螯合剂的存在浓度为2mg/ml至5mg/ml。

在药物组合物中使用螯合剂是本领域技术人员公知的。为了方便，参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。

在本发明进一步的实施方案中，制剂可以进一步包含选自高分子量聚合物或低分子量化合物的稳定剂，其中这样的稳定剂包括，但不限于，聚乙二醇(例如，PEG 3350)，聚乙烯醇(PVA)，聚乙烯吡咯烷酮，羧甲基纤维素，不同的盐(例如，氯化钠)，L-甘氨酸，L-组氨酸，咪唑，精氨酸，赖氨酸，异亮氨酸，天冬氨酸，色氨酸，苏氨酸及其混合物。这些特定稳定剂中的每一种构成本发明的替代实施方案。在本发明优选的实施方案中，稳定剂选自L-组氨酸，咪唑和精氨酸。

在本发明进一步的实施方案中，高分子量聚合物的存在浓度为0.1mg/ml至50mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，高分子量聚合物的存在浓度为0.1mg/ml至5mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，高分子量聚合物的存在浓度为5mg/ml至10mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，高分子量聚合物的存在浓度为10mg/ml至20mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，高分子量聚合物的存在浓度为20mg/ml至30mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，高分子量聚合物的存在浓度为30mg/ml至50mg/ml。

在本发明进一步的实施方案中，低分子量化合物的存在浓度为0.1mg/ml至50mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，低分子量化合物的存在浓度为0.1mg/ml至5mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，低分子量化合物的存在浓度为5mg/ml至10mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，低分子量化合物的存在浓度为10mg/ml至20mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，低分子量化合物的存在浓度为20mg/ml至30mg/ml。在本发明进一步的实施方案中，低分子量化合物的存在浓度为30mg/ml至50mg/ml。

在药物组合物中使用稳定剂是本领域技术人员公知的。为了方便，参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。

在本发明进一步的实施方案中，本发明的制剂进一步包含表面活性剂，其中表面活性剂选自去污剂，乙氧基化蓖麻油，多糖酵解化polyglycolyzed甘油酯，乙酰化单甘油酯，脱水山梨糖醇脂肪酸酯，泊洛沙姆，如188和407，聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯，聚氧乙烯衍生物，如烷基化和烷氧基化的衍生物(吐温类，例如，吐温-20或吐温-80)，单甘油酯或其乙氧基化的衍生物，甘油，胆酸或其衍生物卵磷脂，醇和磷脂，甘油磷脂(卵磷脂，脑磷脂，磷脂酰丝氨酸)，甘油糖脂(吡喃半乳糖苷)，鞘磷脂(神经鞘磷脂)，和鞘糖脂(神经酰胺，神经节苷脂)，DSS(琥珀辛酯钠、琥珀辛酯钙、琥珀辛酯钾)，SDS(十二烷基硫酸钠或月桂基硫酸钠)，二棕榈酰磷脂酸，辛酸钠，胆汁酸及其盐，和甘氨酸或牛磺酸结合物，熊果脱氧胆酸，胆酸钠，脱氧胆酸钠，牛磺胆酸钠，甘胆酸钠，N-十六烷基-N,N-二甲基-3-氨(ammonio)-1-丙烷磺酸盐，阴离子(烷基-芳基-磺酸盐)单价表面活性剂，棕榈酰溶血磷脂酰-L-丝氨酸，溶血磷脂(例如，乙醇胺、胆碱、丝氨酸或苏氨酸的1-酰基-sn-甘油-3-磷酸酯)，溶血磷脂酰和磷脂酰胆碱的烷基、烷氧基(烷基酯)、烷氧基(烷基醚)衍生物，例如溶血磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱的月桂酰和肉豆蔻酰衍生物，和极性首基的修饰，即胆碱，乙醇胺，磷脂酸，丝氨酸，苏氨酸，甘油，肌醇，和带有正电荷的DODAC，DOTMA，DCP，BISHOP，溶血磷脂酰丝氨酸和溶血磷脂酰苏氨酸，两性离子表面活性剂(例如，N-烷基-N,N-二甲基氨-1-丙烷磺酸盐，3-胆酰胺-1-丙基二甲基氨-1-丙烷磺酸盐，十二烷基磷酸胆碱，肉豆蔻酰溶血磷脂酰胆碱，鸡蛋溶血卵磷脂)，阳离子表面活性剂(季铵碱)(例如，十六烷基-三甲基铵溴化物，十六烷基吡啶 氯化物)，非离子表面活性剂，聚环氧乙烷/聚环氧丙烷嵌段共聚物(Pluronics/Tetronics，曲通X-100，十二烷基β-D-吡喃葡糖苷)或聚合表面活性剂(吐温-40，吐温-80，Brij-35)，梭链孢酸衍生物(例如，牛磺二氢梭链孢酸钠，等)，C6-C12长链脂肪酸及其盐(例如，油酸和辛酸)，酰基肉毒碱和衍生物，赖氨酸、精氨酸或组氨酸的N

在药物组合物中使用表面活性剂是本领域技术人员公知的。为了方便，参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。

可以通过常规技术制得本发明的制剂，例如，这些技术描述于Remington’sPharmaceutical Science，1985或Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995中，其中这样的制药工业的常规技术包括将组分适当地溶解和混合来获得所需的终产物。

如上所述，在优选实施方案中，除了肽和丙二醇以外，本发明的制剂还含有缓冲剂和/或防腐剂。

在一个实施方案中，制备这样肽制剂的方法包括：

a)将防腐剂、丙二醇和缓冲剂溶解于水中制得第一种溶液；

b)将肽溶解于水中制得第二种溶液；

c)将第一种溶液和第二种溶液混合；和

d)将c)中混合物的pH调节至所需的pH。

在另一个实施方案中，制备这样肽制剂的方法包括：

a)将防腐剂和缓冲剂溶解于水中制得第一种溶液；

b)将丙二醇加入第一种溶液中；

c)将第一种溶液与含有溶解于水中的肽的第二种溶液混合；和

d)将c)中混合物的pH调节至所需的pH。

在再一个实施方案中，制备肽制剂的方法包括：

a)将防腐剂、缓冲剂和丙二醇溶解于水中制得溶液；

b)将肽加入步骤a)的溶液中；和

c)将步骤b)溶液的pH调节至所需的pH。

本发明的制剂对于生产和用于注射装置中是最佳的，因为它们呈现出生产设备上沉积物的减少和注射装置中阻塞的减少，上述的生产方法可以用于生产适用于生产和/或用于注射装置中的肽制剂。

本发明的制剂适于给药于哺乳动物，优选人。本发明制剂的给药途径可以是将制剂中所含肽有效地运送至合适或所需作用部位的任何途径，如口服、鼻、口腔含化、肺、经皮或非肠道给药。

当和其他等渗剂尤其是和甘露醇相比较时，由于丙二醇减少注射装置阻塞的能力，在优选实施方案中，将本发明的制剂非肠道给药于有此需要的患者。通过注射器，任选地笔式注射器的皮下、肌内、或静脉内注射来进行非肠道给药。或者，可以通过灌输泵来进行非肠道给药。

另外的选择是适于制剂以鼻或肺喷雾形式给药的组合物，其可以是粉末或液体。作为再进一步的选择，还可以经皮来给予制剂，例如，从贴片，任选地离子电渗贴片，或经粘膜给药，例如，通过口腔含化。本发明制剂上述可能的给药方式不被认为是对本发明范围的限制。

当然，可以理解根据本发明制剂中所包括的一种或多种肽，可以将该制剂用于治疗疾病或病症的方法中，为此肽的用途得到表明。本领域技术人员将理解当用于这样的治疗方法中时，必须以给予该肽的有效治疗病症或疾病的量来给予该制剂，其中应该理解“有效量”或“量…有效”的意思是与没有给药剂量的治疗相比较，为了治疗患有待治疗疾病或病症的患者足够有效的剂量。应该理解“有效量”是将通过有资格的专业人员决定的有效剂量，该专业人员可以滴定剂量来获得所需的响应。考虑剂量的因素包括功效、生物利用率、所需的药物动力学/药效特征，待治疗的病症或疾病(例如，糖尿病，肥胖，体重减轻，胃溃疡)，患者相关的因素(例如，体重，健康状况，年龄，等)，共同给药的药物(例如，胰岛素)的存在，给药的时间，或医学专业人员已知的其他因素。

本发明还涉及减少在生产肽制剂过程中生产设备上沉积物的方法，其中该方法包括用浓度为1-100mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在一个实施方案中，通过实施例中所述的模拟装填实验来测量含有丙二醇的制剂相对于含有之前所用等渗剂的制剂所观察到的生产过程中生产设备上沉积物的减少。

在另一个实施方案中，将要用丙二醇替代的等渗剂选自山梨糖醇、蔗糖、甘氨酸、甘露醇、乳糖一水合物、精氨酸、肌醇和二甲砜。

在进一步的实施方案中，用浓度为约1至约50mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在进一步的实施方案中，用浓度为约5至约25mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在再一个实施方案中，用浓度为约8至约16mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在本发明另一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.0至约9.5的pH。

在本发明再一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.0至约8.0的pH。

在本发明再一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.2至约8.0的pH。

在本发明再一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.0至约8.3的pH。

在本发明再一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.3至约8.3的pH。

本发明还涉及减少在生产肽制剂过程中成品中沉积物的方法，其中该方法包括用浓度为1-100mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在一个实施方案中，通过含有丙二醇制剂的小瓶和/或药筒由于沉积物必须废弃的数目相对于含有之前所用等渗剂制剂的小瓶和/或药筒由于沉积物必须废弃的数目的减少来测量成品中沉积物的减少。

在另一个实施方案中，将要用丙二醇替代的等渗剂选自山梨糖醇、蔗糖、甘氨酸、甘露醇、乳糖一水合物、精氨酸、肌醇和二甲砜。

在进一步的实施方案中，用浓度为约1至约50mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在进一步的实施方案中，用浓度为约5至约25mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在再一个实施方案中，用浓度为约8至约16mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在本发明另一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.0至约9.5的pH。

在本发明再一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.0至约8.0的pH。

在本发明再一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.2至约8.0的pH。

在本发明再一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.0至约8.3的pH。

在本发明再一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.3至约8.3的pH。

本发明进一步涉及减少肽制剂对注射装置的阻塞的方法，其中该方法包括用浓度为1-100mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在一个实施方案中，在实施例中所述的模拟用途研究中测量含有丙二醇制剂对注射装置的阻塞相对于含有之前所用等渗剂制剂观察到的阻塞的减少。

在另一个实施方案中，将要用丙二醇替代的等渗剂选自肌醇、麦芽糖、甘氨酸、乳糖和甘露醇。

在进一步的实施方案中，用浓度为约1至约50mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在进一步的实施方案中，用浓度为约5至约25mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在再一个实施方案中，用浓度为约8至约16mg/ml的丙二醇替代所述制剂中之前所用的等渗剂。

在本发明另一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.0至约9.5的pH。

在本发明再一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.0至约8.0的pH。

在本发明再一个实施方案中，含有丙二醇的制剂具有约7.2至约8.0的pH。

在此所引用的所有科学出版物和专利具体引入作为参考。以下实施例说明了本发明的各个方面但不想要以任何方式来限制其范围。

具体实施方式

实施例1

甘露醇替代侯选物的模拟装填实验，点滴试验和阻塞试验

由于实验室实验已经表明，对于针的阻塞和针上的沉积物，没有肽的制剂(“安慰剂”)获得与含有0.3-5.0mg/ml肽的制剂相同的结论，所以已经使用安慰剂(除非另外表明)进行了实施例1中的筛选研究。

制备含有不同等渗剂的制剂

将防腐剂(5.5mg/ml苯酚)和缓冲剂(1.24mg/ml磷酸氢二钠，二水合物)溶解于水中，边搅拌边加入等渗剂。用氢氧化钠和/或盐酸将pH调节至pH7.9。最后，将制剂通过0.22μm滤器过滤。每种制剂中测试的等渗剂和它们的浓度显示于表1中。

表1所测试的制剂的组成

摩尔渗透压浓度

测定不同安慰剂的摩尔渗透压浓度并将结果显示于表2中。

等渗溶液具有约0.286osmol/L的摩尔渗透压浓度。从表2中可以看出，三种制剂(PEG400，蔗糖和木糖醇)离等渗超出20％(0.229-0.343osmol/l)，然而，对于这些种类的实验，不期望摩尔渗透压浓度影响结果，尽管，应该在将来的实验中调节制剂的张力。

表2所测量的制剂的摩尔渗透压浓度

点滴试验

将每种制剂的液滴放置于显微镜载玻片上并使其干燥。通过眼睛和光学显微镜目视检查沉积物。

一些制剂干燥液滴的照片显示于图1中。在该图中，清楚地观察到甘露醇当使其干燥时在显微镜载玻片上形成沉积物。对于山梨糖醇、木糖醇、蔗糖和甘油没有观察到沉积物。最右边的液滴(形状1)含有甘露醇和Arg

在图2中，显示了在显微镜载玻片上形成最多沉积物的侯选物。为了比较，显示了甘油，其没有形成沉积物(甘露醇，精氨酸，肌醇)。

阻塞试验

在该试验中，用装有NovoFine

阻塞试验的结果显示于表3中。

表3使用30G NovoFine在NovoPen 1.5中的阻塞试验

在表3和图3中，观察到肌醇和麦芽糖阻塞了针。为了比较，图3中显示了没有阻塞针的甘油。在图4和表3中，观察到含有甘氨酸、乳糖和甘露醇的制剂在针上形成了很多沉积物。对于甘氨酸，沉积物是沿着针往下沉积的液滴，而对于乳糖和甘露醇，沉积物出现在针尖上。

模拟装填

对每种制剂的1L进行持续24小时的模拟装填实验。24小时后，检查装填设备上沉积物的存在。

基于模拟装填研究的结果(数据未显示)，安慰剂可以分成三种类型。1.没有在装填设备上形成沉积物的那些等渗剂：木糖醇、甘油、葡萄糖一水合物、麦芽糖、PEG400和丙二醇。2.形成少量沉积物且与甘露醇相比较具有优异装填特性的那些等渗剂：山梨糖醇、蔗糖和甘氨酸。3.与甘露醇类似或比甘露醇更差的那些等渗剂：甘露醇、乳糖一水合物，精氨酸，肌醇和二甲砜。

结论

在模拟装填实验中，发现木糖醇、甘油、葡萄糖、麦芽糖、PEG400、丙二醇、山梨糖醇、蔗糖和甘氨酸适于作为甘露醇的替代侯选物。然而，因为葡萄糖是还原糖，因此能够启动制剂中不需要的降解，所以排除该张力调节剂。此外，由于针的阻塞，排除麦芽糖。这样产生以下的侯选物：甘油、木糖醇、山梨糖醇、蔗糖、甘氨酸、丙二醇和PEG400，对于点滴试验、针的阻塞和模拟装填，发现它们作为肽制剂中甘露醇的替代侯选物具有合适的特性。

然而，基于以下的考虑，相对于有待于在与甘露醇的逐一比较研究中进一步研究的其他侯选物选择丙二醇作为等渗剂：

a.观察到丙二醇对含有Arg

b.观察到丙二醇对抗微生物防腐测试没有影响；以及

c.使用丙二醇不需要进行进一步的毒性研究试验实施例2

在模拟装填研究和模拟使用研究中比较含有甘露醇和丙二醇的安慰剂制剂

制剂的制备

将防腐剂和缓冲剂溶解于水中，并边搅拌边加入等渗剂。使用氢氧化钠和/或盐酸将pH调节至目标pH。最后，将制剂通过0.22μm的滤器过滤。制剂的组成如下：

模拟装填研究

如实施例1中所述的进行持续24小时的模拟装填研究，24小时后，检查装填设备上沉积物的存在。对于丙二醇制剂，没有观察到装填设备上的沉积物。相比之下24小时后，对于甘露醇制剂，观察到装填设备上很多的沉积物(参见图6)。

模拟使用研究

对于模拟使用研究，如实施例1中所述的进行阻塞试验。在十个工作日的研究时段中使用相同的针，每天检查针上沉积物的存在。图7显示了用含有甘露醇(上图)或丙二醇(下图)的制剂给药的针的照片。当甘露醇用作等渗剂时，在48％的情况中观察到针上的沉积物，而当丙二醇用作等渗剂时，没有观察到沉积物。

实施例3

比较含有Arg

制剂的制备

将防腐剂、等渗剂(甘露醇或丙二醇)和缓冲剂溶解于水中，并将pH调节至所需的pH。边缓慢搅拌边将Arg

Arg

磷酸氢二钠，二水合物(1.42mg/ml)

苯酚(5.5mg/ml)

甘露醇或丙二醇(35.9或14.0mg/ml)

注射用水(达1.0ml)

pH：8.15

模拟使用研究

对于模拟使用研究，如实施例1中所述的进行阻塞试验，不同的是使用G31针。在十个工作日的研究时段中使用相同的G31针，每天检查针上沉积物的存在。图7显示了当用含有丙二醇(下图)的制剂给药时，没有沉积物的针的照片，或当用含有甘露醇(下图)的制剂给药时，显示沉积物的针的照片。

对于含有甘露醇的制剂，在第4天观察到10个情况中有1个针阻塞，第5天10个情况中有2个，第8天10个情况中有3个，第9天10个情况中有4个。相比之下，对于含有丙二醇的制剂，没有观察到针的阻塞。

据认为如果将pH调节至7.40、7.70或7.90，也将会获得与用上述含有丙二醇的制剂所获得的那些相似的结果。此外，可能被测试的其他制剂包括具有以下组成的那些：

缓冲剂：甘氨酰甘氨酸(1.32mg/ml)，L-组氨酸(1.55mg/ml)，Hepes(2.38mg/ml)，或二甘氨酸(1.63mg/ml)

防腐剂：苯酚(5.0或5.5mg/ml)，苯甲醇(18mg/ml)或间-甲酚和苯酚的混合物(2.5/2.0mg/ml)

丙二醇：14.0或14.3mg/ml

注射用水：达1.0ml

pH：7.40，7.70，7.90或8.15

实施例4

肽浓度对针阻塞的影响

如实施例3中所述的制得Arg

Liraglutide：0，0.3，3和5mg/ml

磷酸氢二钠，二水合物：0.71mg/ml

磷酸二氢钠，二水合物：0.62mg/ml

甘露醇：36.9mg/ml

苯酚：5.0mg/ml

注射用水：达1.0ml

pH 7.40

如实施例3中所述的进行模拟使用研究，不同的是使用G30针，结果(数据未显示)表明含有甘露醇的制剂的阻塞作用相对于用丙二醇制剂观察到的阻塞的不存在与肽浓度无关。

实施例5

含有甘露醇的Lysβ29(Nε-十四烷酰)脱(B30)人胰岛素和

NovoMix30制剂中针的阻塞

制剂的制备

如下制备含有Lysβ29(Nε-十四烷酰)脱(B30)人胰岛素的制剂：

a)将缓冲剂，氯化钠，防腐剂(苯酚和间-甲酚)和甘露醇溶解于水中制得第一种溶液

b)将Lysβ29(Nε-十四烷酰)脱(B30)人胰岛素和醋酸锌溶解于水中制得第二种溶液

c)将步骤b)的含有肽的溶液加入步骤a)的溶液中；和

d)将溶液的pH调节至所需的pH。

以上述方式制得的含有Lysβ29(Nε-十四烷酰)脱(B30)人胰岛素的制剂的组成如下：

Lysβ29(Nε-十四烷酰)脱(B30)人胰岛素(2400nmol)，苯酚(1.80mg/ml)，间-甲酚(2.06mg/ml)，甘露醇(30.0mg/ml)，磷酸二钠，二水合物(0.890mg/ml)，氯化钠(1.17mg/ml)，醋酸锌(65.4μg/ml)，注射用水(达1.0ml)，pH：7.4。

如下制备含有NovoMix 30的制剂：

a)将缓冲剂、氯化钠、苯酚、甘露醇和氢氧化钠溶解于水中制得溶液

b)制得氯化钠、苯酚和甘露醇的水溶液

c)制得鱼精蛋白硫酸盐的水溶液

d)制得胰岛素、盐酸和锌的水溶液

e)将溶液b)、c)和d)混合

f)将溶液e)加入步骤a)的溶液中

g)将溶液的pH调节至所需的pH，并在室温下结晶

h)将间-甲酚、苯酚和甘露醇溶解于水中制得溶液

i)将溶液h)加入步骤g)的晶体部分中；和

j)将pH调节至所需的pH

以上述方式制得的含有NovoMix 30的制剂的组成如下：

速效胰岛素制剂(100单位/ml)，鱼精蛋白硫酸盐(约0.33mg/ml)，苯酚(1.50mg/ml)，间-甲酚(1.72mg/ml)，甘露醇(30.0mg/ml)，磷酸二钠二水合物(1.25mg/ml)，氯化钠(0.58mg/ml)，锌(19.6μg/ml)，注射用水(达1.0ml)，pH:7.3。

结果

如实施例3中所述的进行模拟使用研究，使用G31针，其中研究20个针10天。结果如下：观察Lysβ29(Nε-十四烷酰)脱(B30)人胰岛素对针的阻塞：第2天(5％)，第3天(70％)和第4天(100％)。观察NovoMix 30对针的阻塞：第3天(5％)，第4天(10％)，第5天(35％)，第6天(40％)，第8天(50％)，第9天(55％)和第10天(80％)。因此，甘露醇对针阻塞的作用与制剂中所包括肽的类型无关，因为用Arg

实施例6

含有丙二醇的Lysβ29(Nε-十四烷酰)脱(B30)人胰岛素和NovoMix

30制剂的测试

Lysβ29(Nε-十四烷酰)脱(B30)人胰岛素和NovoMix 30制剂的制备和组成如实施例5中所述，不同的是用一定浓度的确保张力的丙二醇替代甘露醇。然后如实施例5中所述的进行模拟使用试验。

基于含有甘露醇的Lysβ29(Nε-十四烷酰)脱(B30)人胰岛素和NovoMix 30制剂的阻塞作用与用含有甘露醇的Arg