用以制备麻醉剂组成物的脂质饼块及其制备方法

摘要

本揭示内容提供一种脂质饼块，用于以局部投药的方式施予一有此需要的个体。脂质饼块含有局部麻醉剂及脂质混合物；本揭示内容亦揭示一种制备麻醉剂组成物的方法，相较于现有技术较为简便，更易进行大规模制造，且可获得局部麻醉剂相对于磷脂量的高摩尔比例。这种麻醉剂组成物适于传递药物并具有延长药效时间的能力。

说明书

本申请为申请日为2019年03月30日、申请号为201980019541.X、名称为“缓释麻醉剂组成物及其制备方法”的发明专利申请的分案申请。

相关申请案

本申请案主张2018年3月30日申请的美国申请案第62/650,912号的权益，该案的全部揭示内容以引用的方式并入本文中。

背景

技术领域

本发明是关于用以产生缓释麻醉剂组成物的药物传递系统。本发明是关于制备此药物传递系统的方法。本发明还关于适用于药物传递系统的缓释医药组成物，其具有延长的药效持续时间。

背景技术

数种开发缓释局部麻醉的方法已被报导，举例如下：将待布卡因游离碱(dibucaine free base)、待布卡因盐酸(dibucaine HCl)、以及布比卡因盐酸(bupivacaine HC1)添加入聚合物基质中，以1:4与1,3-双羧基对苯丙基癸二酸酐共聚物(l,3-bis(p-carboxyphenoxy)propane-sebacic acid anhydride)混合，而达成药物缓释。另一方面，一种以复杂程序制备的多囊脂质体的(multivesiculare liposomal,MVL)局部麻醉剂，也被应用于局部麻醉剂的传递(US 8,182,835)。

为了达成改良药效的目的，利用具有高药物承载[例如：高药物-脂质比例(highdrug to lipid ratio)]的脂质基底传递载体，习知具有高药物承载的脂质基底剂型的制法，一般而言都涉及冗长的步骤及高生产成本。因此，改善药效及简化制程的缓释局部麻醉剂仍存在迫切的需求。

发明内容

本揭示内容提供缓释麻醉剂组成物或其制备方法，制备方法包括以单步骤冷冻干燥法取得脂质饼块，内含局部麻醉剂及脂质混合物，以及以控制酸碱值的缓冲溶液水合，以形成包含局部麻醉剂及脂质混合物的脂质基底复合物。此缓释麻醉剂组成物提供快速的麻醉起效，延长局部麻醉持续时间，并具较低的毒性。在一些实施方式中，局部麻醉剂是酰胺类麻醉剂(amide-type anesthetic)。

在一些实施方式中，局部麻醉剂为罗哌卡因。其他可以使用的局部麻醉剂包含：利多卡因、布比卡因、左旋布比卡因。

在一些实施方式中，本揭示内容提供一种简便及稳定的麻醉剂组成物制备方法，该麻醉剂组成物是用于以局部投药的方式将一局部麻醉剂施予一有此需要的个体，其中，水合步骤可在室温下进行。

在一些实施方式中，脂质饼块是使用磷脂形成，以在室温下与缓冲溶液再水合，取得具有高缔合效率的局部麻醉剂，而无须提升温度，花费额外的能源预算，并避免了临床操作上的不便利。

根据本揭示内容，脂质饼块包含局部麻醉剂及脂质混合物，脂质混合物包括至少一中性饱和磷脂，中性饱和磷脂包含具有碳原子数不超过18的长碳链的饱和脂肪酸；藉此，脂质饼块将易于保存，而麻醉剂组成物的制备，可藉由在制备设备或是预先确立控制条件(例如：在室温中)的临床使用下，将脂质饼块与缓冲溶液混合而成。在一些实施方式中，具有长碳链的饱和脂肪酸带有的碳原子数为14、16、或是18。

在一些实施方式中，本揭示内容的脂质饼块，是在溶剂系统中(例如：叔丁醇单溶剂或叔丁醇-水共溶剂)溶解非极性的罗哌卡因、磷脂、及胆固醇，接着以冷冻干燥技术移除溶剂系统制备而成。

药学上可接受的缓冲溶液的酸碱值，可被选用作为调节麻醉剂组成物中，被包埋的局部麻醉剂相对于未受包埋的局部麻醉剂的比例。在一些实施方式中，在麻醉剂组成物的脂质基底复合物中，局部麻醉剂相对于磷脂(mol

在一些实施方式中，本揭示内容也揭露施予有此需要的个体产生麻醉或是缓解疼痛的方法，包含施予个体本揭示内容的麻醉剂组成物。

在一些实施方式中，本揭示内容提供于个体中控制疼痛或防治性处置的方法，包含施予个体本揭示内容的麻醉剂组成物。

本揭示内容将藉助于附图及随后的实施方式更易理解其他发明目的、优势、及新颖特征。

附图说明

图1A为通过冯佛雷测试(Von Frey test)所绘制的50％缩掌阈值图，其中本揭示内容的麻醉剂组成物(罗哌卡因组成物)为测试标的，而罗哌卡因溶液及市售延长释放的脂质体布比卡因(ER布比卡因)做为参考物，在脚掌切口后，生理食盐水、罗哌卡因组成物、罗哌卡因溶液、及ER布比卡因经足底施打；误差值以平均标准差呈现(SEM)，在以ER布比卡因组做为参考时，*表示P＜0.05，BBL表示手术前阈值，ABL则是手术后阈值。

图1B为最大可能效果百分比(％MPE)图，由50％缩掌阈值利用公式％MPE＝(阈值

图2A为通过冯佛雷测试(Von Frey test)所绘制的50％缩掌阈值图，其中本揭示内容的麻醉剂组成物(罗哌卡因组成物)为测试标的，而ER布比卡因做为参考物。经由坐骨神经阻断技术施予生理食盐水、罗哌卡因组成物、及ER布比卡因；误差值以平均标准差呈现(SEM)。

图2B为最大可能效果百分比(％MPE)图，利用公式％MPE＝(阈值

具体实施方式

除非另外指明，否则以下术语在用于上文及本揭示内容时应理解为具有以下意义。

除非上下文清楚指明，否则如本文所用的单数形式「一(a/an)」及「该、此(the)」包括所提及内容的复数形式。

除非清楚指明，本文所有数值均应了解是以「约(about)」修饰，而当指一测量值(诸如一数量、一持续时间及此类)时，其表示包含特定值的±10％、±5％、±1％、或是0.1％的变量，该变量适用于描述药物的所需值。

「缔合效率(Association efficiency)」表示在麻醉剂组成物中，包埋于含有局部麻醉剂的脂质基底复合物中的原料药(drug substance)的量，其是藉由分离的脂质基底复合物中的原料药的量相对于麻醉剂组成物中的原料药的量的比例计算而得。该领域具通常知识者可通过常规手段由麻醉剂组成物中取得该分离的脂质基底复合物。在一些实施方式中，所述的分离的脂质基底复合物是从麻醉剂组成物中所取得，其是利用离心方法，例如：传统离心、密度梯度离心、差速离心；或利用过滤方法，例如:透析过滤、凝胶过滤和膜过滤。

如本文所用的术语「治疗(treat、treating或treatment)」包括预防性(preventative，例如防治性(prophylactic))、缓和性(palliative)及治愈性(curative)方法、用途或结果。术语「治疗(treatment或treatments)」亦可参照为组成物或者药剂。术语「治疗(treating)」包含以已知技术侦测到降低或是减缓一或多种疼痛的症状、征兆，或是完全改善疼痛。疼痛及疼痛的症状可用该领域已知的方法评估，例如：疼痛指数及50％缩掌阈值。举例而言，相对于治疗前或是控制组的个体，本揭示内容的缓释麻醉剂组成物的使用方法，若能使一或多种疼痛症状达到至少1％的降低，则会被考虑作为治疗方针。因此，降低可约为5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或是100％，或是前述任意数值之间。

局部麻醉剂

术语「局部麻醉剂」或「局部麻醉药物」如本文所指，包含一组或多组物质，可于个体的限定区域经由减少神经末梢激发或抑制外周神经(peripheral nerves)传导过程导致感觉丧失。在一些实施方式中，局部麻醉药物为酰胺类麻醉剂。典型酰胺类麻醉剂结构包含亲脂部分以及藉由酰胺键结(–NHCO–)的亲水部分。合适的酰胺类麻醉剂包括但不限于利多卡因(lidocaine)、布比卡因(bupivacaine)、左旋布比卡因(levobupivacaine)、罗哌卡因(ropivacaine)、甲哌卡因(mepivacaine)、吡咯卡因(pyrrocaine)、阿替卡因(articaine)、待布卡因(dibucaine)或丙胺卡因(prilocaine)。在一些实施方式中，局部麻醉剂为罗哌卡因碱。

脂质饼块

脂质饼块包含脂质混合物及一种或多种局部麻醉剂，此脂质饼块易于大量制备且可长期储存，可延长组成物的保值期，并且当需使用时可于室温下立即地水合，适合于临床使用。上述脂质混合物可包含一种或多种磷脂但不含固醇，或包含一种或多种磷脂及固醇(特别是胆固醇)，其中固醇的摩尔百分比不大于总脂质混合物的量的50％。在一些实施方式中，胆固醇于脂质混合物的摩尔百分比为约0％至50％，或可选地约25％至40％、或为33％至35％。在一些实施方式中，磷脂及胆固醇的摩尔比为1:1至3:1。

脂质饼块可由以下方法制备而得1)将脂质混合物及一或多种局部麻醉剂溶解于溶剂系统中以形成均质溶液，均质溶液中可包含一或多种溶剂2)移除溶剂以固化脂质混合物及局部麻醉剂结构。可使用已知的技术移除溶剂，例如：冷冻干燥法(lyophilization)。适于冷冻干燥的溶剂系统的实施例，包括但不局限于：叔丁醇及含叔丁醇-水共溶剂系统，并可包含但不限于其他非水相溶剂，例如：丙酮、乙腈、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、甲醇、二氯甲烷、二甲基亚砜、或四氯化碳。

麻醉剂组成物

术语「麻醉剂组成物」表示适于局部给药的产品。在一些实施方式中，麻醉剂组成物包括脂质基底复合物及未包埋的的局部麻醉剂。在一些实施方式中，脂质基底复合物包含多囊脂质体及包埋于多囊脂质体的局部麻醉剂。术语「包埋」或「包埋过程」是指目标原料药包覆、镶嵌或缔合于多囊脂质体的双层膜。

本揭示内容的脂质基底复合物的颗粒粒径可藉由该领域通常知识者的多种常规手段决定。在一些实施方式中，麻醉剂组成物中的脂质基底复合物，其平均颗粒粒径不小于1微米(μm)，优先选择大于5微米，例如：介于5微米至50微米，或是介于10微米至25微米的范围内。另外，麻醉剂组成物的脂质基底复合物的中径(D50)不小于1微米，以及，优先选择不小于5微米，范围可介于例如：介于5微米至50微米、5微米至40微米、5微米至30微米、5微米至20微米、5微米至15微米之间。在一些实施方式中，中径(D50)是在累积颗粒粒径分布中，累积百分比50％的附聚颗粒组成的脂质基底复合物的颗粒直径，可为5微米、大于7微米或是更高。在一些实施方式中，中径(D50)是脂质基底复合物的附聚颗粒中，累积颗粒粒径分布百分比为50％的附聚颗粒的颗粒直径，为25微米或较小、20微米或较小、或15微米或较小。

在一些实施方式中，麻醉剂组成物的脂质基底复合物，其累积颗粒粒径分布的累积颗粒直径百分比90％(D90)时，不小于10微米，范围可介于例如：10微米至300微米之间、20微米至200微米之间、或是20微米至100微米之间；此外，D90的下限不特别限于25微米或更大、或30微米或更大；另外，为改善每单位剂量的缔合效率，脂质基底复合物的附聚颗粒的形状并未特别限定。

为制备可用的麻醉剂组成物，脂质饼块系以缓冲溶液水合，酸碱值不小于5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、或7.0。在一些实施方式中，缓冲溶液的酸碱值范围介于5.5至8.0之间，及优先选择介于6.0至7.8之间、6.0至7.5之间、6.3至7.5之间、6.5至7.5之间、6.7至7.5之间、或6.8至7.5之间。

本揭示内容中合适的缓冲溶液包括，但不限于，柠檬酸盐、乙酸盐、苹果酸盐、哌嗪、琥珀酸盐、2-(N-吗啉代)乙磺酸(2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid，MES)、组氨酸、双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷(bis-tris)、磷酸盐、乙醇胺、N-(2-乙酰氨基)亚氨基二乙酸(N-(2-acetamido)iminodiacetic acid，ADA)、碳酸盐、N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸(N-(2-acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid，ACES)、1,4-哌嗪二乙磺酸(1,4-piperazinediethanesulfonic acid，PIPES)、3-吗啉代-2-羟基丙磺酸(3-morpholino-2-hydroxypropanesulfonic acid，MOPSO)、咪唑、N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(N,N-bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethanesulfonic acid，BES)、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸(4-(2-hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid，HEPES)、三乙醇胺(triethanolamine)、赖氨酸、三羟甲基甘氨酸(tris)和甘氨酰甘氨酸(glycylglycine)。因应临床适应症和总注射剂量，可基于麻醉剂的分配系数选择适当的缓冲溶液的酸碱值调控未包埋的酰胺类麻醉剂的量。

在一些实施方式中，缓冲溶液包含组氨酸，浓度范围由1mM至200mM、由10mM至150mM、或由40mM至120mM。

在一些实施方式中，缓冲溶液包含磷酸，浓度范围介于由1mM至200mM、由10mM至180mM、或由40mM至160mM。

未包埋的酰胺类麻醉剂的量是麻醉剂组成物缔合效率的函数，可经由离心方法测定。数学上，未包埋的酰胺类麻醉剂的量可表示如下：

A

其中A

在特定的实施方式中，脂质基底复合物中的酰胺类麻醉剂相对于磷脂(mol

麻醉剂组成物中酰胺类麻醉剂的浓度应高于2毫克/毫升(mg/mL)，以达到临床治疗效益。合适的酰胺类麻醉剂浓度包括但不限于从2毫克/毫升至30毫克/毫升，和从10毫克/毫升至20毫克/毫升。本揭示内容中，限制麻醉剂组成物中未包埋的麻醉剂药量，可提供的益处为获得较高的最大耐受剂量(取决于血浆中麻醉剂浓度是否引起中枢神经系统和心血管系统的毒性)，并仍可提供快速麻醉的功效。

临床应用中，缔合效率于本揭示内容特定实施方式为70％至99.9％、75％至99.5％、80％至99.5％、85％至99.5％、90％至99.5％、95％至99.5％。这些滞留于给药区域的包埋酰胺类麻醉剂的脂质基底复合物可视为一药物贮存库，可将酰胺类麻醉剂逐渐释放至局部环境中以维持其有效剂量。在一些实施方式中，单剂皮下施予本发明的罗哌卡因组成物所得的罗哌卡因，半衰期相较于施予罗哌卡因溶液可延长至少10倍。且相较于罗哌卡因溶液，施予本发明的罗哌卡因组成物的麻醉效果亦显著地延长。

多层囊泡(Multilamellar vesicle)

术语「多层囊泡(Multilamellar vesicle)」，是指一种颗粒，其特征在于具有水性的内部空间，由一个或多个双层的膜形成囊泡将水性的内部空间与外部介质隔离。多层囊泡的双层膜通常由脂质形成，脂质为合成的或天然的两亲性分子，空间上两头分别为疏水端和亲水端。在本揭示内容的一些实施方式中，多层囊泡可由一层以上的脂质双层膜形成。

一般而言，多层囊泡的双层膜由脂质混合物组成，通常包含双脂链脂质，诸如磷脂、甘油二酯、二脂糖脂，单脂链脂质，诸如鞘磷脂和鞘糖脂，类固醇，例如胆固醇及其衍生物，和其组合。本揭示内容的磷脂实施例包括但不限于1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DLPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DMPC)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DPPC)、1-棕榈酰-2-硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1-palmitoyl-2-stearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，PSPC)、1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine，POPC)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DSPC)、1,2-二烯酰-1-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1,2-dioleoy1-sn-glycero-3-phosphocholine，DOPC)、氢化大豆磷脂酰胆碱(hydrogenated soyphosphatidylcholine，HSPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1’-rac-甘油)(钠盐)(1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phospho-(1’-rac-glycerol)(sodium salt)，DMPG)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸-(1’-rac-甘油)(钠盐)(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phospho-(1’-rac-glycerol)(sodium salt)，DPPG)、1-棕榈酰-2-硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1’-rac-甘油)(钠盐)(1-palmitoyl-2-stearoyl-sn-glycero-3-phospho-(1’-rac-glycerol)(sodium salt)，PSPG)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸-(1’-rac-甘油)(钠盐)(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phospho-(1’-rac-glycerol)(sodium salt)，DSPG)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1’-rac-甘油)(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-(1’-rac-glycerol)，DOPG)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(钠盐)(1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine(sodium salt)，DMPS)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(钠盐)(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine(sodium salt)，DPPS)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(钠盐)(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine(sodium salt)，DSPS)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine，DOPS)，1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸(钠盐)(1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphate(sodiumsalt)，DMPA)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸(钠盐)(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphate(sodium salt)，DPPA)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸(钠盐)(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphate(sodium salt)，DSPA)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸(钠盐)(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphate(sodium salt)(DOPA)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine，DPPE)、1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine，POPE)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine，DSPE)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine，DOPE)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸-(1’-肌醇)(铵盐)(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phospho-(1’-myo-inositol)(ammonium salt)，DPPI)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸肌醇(铵盐)(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoinositol(ammonium salt)，DSPI)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸-(1’-肌醇)(铵盐)(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-(1’-myo-inositol)(ammoniumsalt)，DOPI)、心磷脂(cardiolipin)、L-α-磷脂酰胆碱(L-α-phosphatidylcholine)(EPC)、和L-α-磷脂酰乙醇胺(L-α-phosphatidylethanolamine)(EPE)。

磷脂的实施例，包括但不限于：1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DMPC)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DLPC)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、1,2-二烯酰-1-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1’-rac-甘油)(DOPS)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸(DOPA)、卵磷脂酰胆碱(卵PC)、磷脂酰乙醇胺(卵PE)、1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(POPE)、心磷脂(cardiolipin)和1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸(钠盐)(DMPA)。

本揭示内容中合适的磷脂为饱和磷脂，其衍生自两条饱和长碳链脂肪酸，其中每一条脂肪酸上的长碳链碳原子至少12个且不超过20个。在一些实施方式中，本揭示内容中合适的饱和磷脂可选自于DLPC、DMPC、及DPPC所组成的群组、及其组合。

在一些实施方式中，本揭示内容的脂质混合物包含合适的磷脂，例如：一个正价或是负价磷脂，以及确定含量的不饱和磷脂，其中相对于磷脂总量而言，确定含量的不饱和磷脂可少于10％摩尔百分比，例如：9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、或1％。

局部麻醉及疼痛的防治性处置

本揭示内容的麻醉剂组成物是用于局部麻醉，并可施予于神经周围或是于手术创伤处，以处置疼痛。在一些实施方式中，疼痛为慢性术后疼痛或分娩痛。在一些实施方式中，麻醉剂组成物通过皮下、皮内、或肌内施予一有此需要的个体，以处置疼痛。

在一些实施方式中，局部麻醉包括区域阻滞及浸润麻醉。区域阻滞是经由注射局部麻醉剂至待麻醉区域的周围麻醉，不须定位于特别神经；浸润麻醉是注射局部麻醉剂至终末神经末梢麻醉。

在一些实施方式中，本揭示内容组成物通过神经阻断施予，作为疼痛的防治性处置，例如：针对治疗术后疼痛，在手术前施予需要个体组成物。

神经阻断包含添加麻醉剂至外周神经旁或是外周神经内，以降低疼痛或是产生麻痹感。

神经阻断的种类包括但不限于运动、感觉、分化和自主阻断，及进一步地，包括但不限于臂丛神经(腋、肌间沟、锁骨上、锁骨下)、个别上肢神经阻断(正中、桡、尺、肌皮、腋)、坐骨、踝、跖骨、口腔、股、窝部、隐、末端、指神经、深腓，浅腓，胫，腓肠和隐神经阻断。

本揭示内容将通过以下具体、不受限定的实施例描述之。

以下实施例用于阐明本揭示内容中特定实施例的制备及特征。

实施例1

多种磷脂制备罗哌卡因组成物的方法

磷脂，包括DLPC、DMPC、DPPC、DOPG、DOPC、DOPS、DOPA、Egg PC、Egg PE、POPE、cardiolipin、及DMPA购自于NOF Corporation(日本东京)、或是Lipoid GmbH(德国路德维希港)；胆固醇购自于Sigma-Aldrich(德国达姆施塔特)或是Dishman Pharmaceuticalsand Chemicals(印度古吉拉特邦)，而罗哌卡因购自于Apollo Scientific(英国柴郡)或Dishman Pharmaceuticals and Chemicals；其他所有的化学品购自于Sigma-Aldrich。

为了制备脂质饼块，罗哌卡因与表1中不同种的脂质混合物，以药物相对磷脂比例(D:PL)为1.458微摩尔/微摩尔混合，即，磷脂:胆固醇:罗哌卡因＝2:1:2.9。混合脂质及罗哌卡因，并溶解于叔丁醇或叔丁醇-水的共溶剂(体积比为1:1)，以形成液相结构。每个液相结构样品冷冻30至60分钟后，持续冷冻干燥至隔日，以取得脂质饼块。

为制备做为赋形剂对照组的脂质结构，秤取摩尔比例为2:1的DMPC:胆固醇溶液的脂质混合物，溶解在叔丁醇中。将所得样品冷冻60分钟后，持续冷冻干燥至隔日，以得到赋形剂的冻干饼块。

在不低于25℃/室温(AT)下，将冻干饼块与脂质饼块分别与酸碱值6.5的50mM的组胺酸缓冲液水合2-10分钟，以形成赋形剂及罗哌卡因组成物，后续进行缔合效率及颗粒粒径分布的测定。

实施例2

罗哌卡因组成物的定性

实施例1的制备样品将以下面叙述的方法测定其缔合效率。200微升的罗哌卡因组成物在4℃下以3000xg离心5分钟。移除上清后，取得分离的脂质基底混合物，再重新悬浮至200微升；使用已知浓度的测试药品溶液(例如罗哌卡因)建立其吸光度的参考标准。使用紫外光/可见光分光光度计测量原始罗哌卡因组成物和分离的脂质基底混合物中的罗哌卡因药物量。缔合效率代表分离的脂质基底混合物相对于罗哌卡因组成物中的药物量的比例。经由将脂质饼块的D：PL乘以缔合效率来计算分离的脂质基底复合物的D：PL脂质饼块，称为「最终D:PL」。

使用激光绕射分光仪(LA-950V2,Horiba)，测量每种罗哌卡因组成物的粒径。检测以50mM组氨酸缓冲液(酸碱值为6.5)或磷酸缓冲液(酸碱值7.0)水合脂质饼块所形成的含有罗哌卡因的脂质基底复合物的中径，并比较于表1。

含有DMPC、DLPC、或DPPC的脂质饼块呈现非常相近的缔合效率(分别为90％、90％、及92％)。然而，脂质基底复合物的中径(D50)则有所差异。藉由含有DMPC、DLPC、或DPPC的脂质饼块，经水合所生成的罗哌卡因组成物中最终含有罗哌卡因的脂质基底复合物，其D50分别为6.6±0至12.7±0.4、7.8±0.1、及14.9±0.1微米，结果列举于表1。

表1、含有不同磷脂的罗哌卡因组成物的缔合效率及中径(D50)

N.A.(不适用)：组成物因为过粘，造成测定步骤中离心的问题，而甚至经再一次的离心也未能解决。

a.磷酸缓冲液的水合

b.组胺酸缓冲液的水合

实施例3

含不同磷脂的罗哌卡因组成物的制备

磷脂、胆固醇、罗哌卡因、以及其他所有化学品的来源均详述于实施例1。

为了制备脂质饼块，将罗哌卡因与不同的脂质混合物以磷脂:胆固醇:罗哌卡因＝2:1:2.9的摩尔比例混合，其中磷脂为DMPC及表2的一种其他磷脂的混合，磷脂中DMPC:一种其他磷脂的摩尔比例为1.8:0.2。脂质与罗哌卡因混合后，溶于叔丁醇，以形成液相结构。每个液相结构样品冷冻30至60分钟后，持续冷冻干燥至隔日以取得脂质饼块。

脂质饼块在室温下，以50mM组胺酸缓冲液(酸碱值6.5)水合，以形成罗哌卡因组成物，接续进行缔合效率及颗粒粒径分布的测定。

罗哌卡因组成物中，由含有DMPC/DLPC、DMPC/DPPC、DMPC/Egg PC、DMPC/Egg PE、或DMPC/POPE的脂质饼块水合产生的最终含有罗哌卡因的脂质基底混合物，显现出非常相似的的缔合效率(分别为90％、91％、91％、91％、及91％)。水合含有DMPC/DLPC、DMPC/DPPC、DMPC/Egg PC、DMPC/Egg PE、或DMPC/POPE的脂质饼块所生成的罗哌卡因组成物的脂质基底混合物，其D50分别为11.4±0.3、14.3±0.1、11.6±0.0、11.5±0.0、及11.0±0.3微米，结果总结于表2。

表2、含不同磷脂组合的罗哌卡因组成物的缔合效率及中数直径(D50)

N.A.(不适用)：组成物因为过粘，造成测定步骤中离心的问题，而甚至经再一次的离心也未能解决。

实施例4

大鼠脚掌切口的麻醉效果

根据Pain.1996Mar；64(3):493-501，使用Sprague-Dawley大鼠以评估脚掌切口后的麻醉效果。大鼠居留室提供12小时光照/12小时黑暗昼夜调节周期，实验只在光照时段操作。在本揭示内容中，罗哌卡因组成物作为一种麻醉剂组成物的实施方式，制备方法参阅实施例1，其中DMPC:胆固醇:罗哌卡因＝2:1:2.9的脂质饼块以酸碱值6.8、50mM的组胺酸缓冲液水合。罗哌卡因溶液是将罗哌卡因以19.0毫克/毫升溶于待注射水中。市售FDA核可的延长释放的布比卡因脂质体剂型(ER布比卡因)购自于Pacira Pharmaceuticals,Inc。在脚掌切开一个切口后，各切口给予1.9毫克的罗哌卡因组成物及罗哌卡因溶液、1.33毫克的ER布比卡因(等效剂量)的足底注射，比较罗哌卡因组成物、罗哌卡因溶液、生理食盐水、及ER布比卡因的活体效果。

在手术前3天至前1天，量测27只大鼠的手术前阈值(BBL)。在手术后30分钟，27只大鼠再测量手术后阈值(ABL)。选取阈值高于9克BBL及低于4克ABL的大鼠，用于正式实验。20只大鼠随机分为4组(一组5只大鼠)。以100％氧气中含有2％至3.5％的异氟醚麻醉，每只大鼠在左后脚掌足底处理1公分的纵向切口以及筋膜三个切口，并于足底注射生理食盐水(100微升)、罗哌卡因组成物(19.0毫克/毫升，100微升)、ER布比卡因(13.3毫克/毫升，100微升)、或是罗哌卡因溶液(19.0毫克/毫升，100微升)。在足底注射后，于BBL(-1到-3天)、ABL、以及特定时间点(0.5、1、2、3、4、5、6、7以及24小时)下，使用Dixon上下(up-down)法量测得每只大鼠的50％缩掌阈值。

在脚掌缺口处理后，给予罗哌卡因组成物(钻石状)、罗哌卡因溶液(三角形)、ER布比卡因(方形)、以及生理食盐水(圆形)后的麻醉效果例示于图1A及图1B。将各组别的平均50％脚掌缩掌阈值绘制为图；数据以50％脚掌缩掌阈值(克)随时间变化呈现(图1A)。每一次处理的最大可能效果百分比(％MPE)是以50％脚掌缩掌阈值通过公式％MPE＝(阈值

实施例5

植入管套的坐骨神经疼痛大鼠模型的麻醉效果

Pain.1999Oct；83(1):37-46中记载了将管套(cuff)移植至Sprague-Dawley大鼠的坐骨神经后，评估麻醉效果的技术。大鼠居留室提供12小时光照/12小时黑暗的昼夜调节周期，实验只在光照时段操作。在本案揭示内容中，罗哌卡因组成物作为一种麻醉剂组成物的实施方式(罗哌卡因组成物)，制备方法参阅实施例1，其中DMPC:胆固醇:罗哌卡因＝2:1:2.9的脂质饼块以酸碱值6.8、50mM的组胺酸缓冲溶液水合。市售FDA核可的延长释放的布比卡因脂质体剂型(ER布比卡因)购自于Pacira Pharmaceuticals,Inc。在管套移植至大鼠的坐骨神经后，通过坐骨神经注射技术给予25毫克/公斤的罗哌卡因组成物及25毫克/公斤及35毫克/公斤的ER布比卡因，比较罗哌卡因组成物、ER布比卡因、及生理食盐水的活体效果。

麻醉期间，3毫米至4毫米的PE60或是PE90小管被移植入左大腿的坐骨神经。在置入管套后，肌肉及皮肤以2-3针缝合。在管套移植后的基线(管套移植的2至3周后)，测定疼痛诱发情形，展现出阈值小于4克的大鼠被用于正式测试。总计21只大鼠随机分为3组(一组7只大鼠)，利用坐骨神经阻断技术给予罗哌卡因组成物(25毫克/公斤)、ER布比卡因(25毫克/公斤)或是ER布比卡因(35毫克/公斤)。四只大鼠给予生理食盐水作为控制组。在注射前及注射后的特定时间点(1、3、4、5、6、7、8以及9小时)，使用Dixon上下法测得每只大鼠的50％缩掌阈值。

给予罗哌卡因组成物(25毫克/公斤，空心三角形)、ER布比卡因(25毫克/公斤，空心圆形；35毫克/公斤，实心倒三角形)、生理食盐水的麻醉效果见于图2A与图2B。将各组别的50％平均脚掌缩掌阈值作图，也就是50％脚掌缩掌阈值(克)对应时间作图(图2A)。最大可能效果百分比(％MPE)由50％脚掌缩掌阈值通过公式％MPE＝(阈值