一种具缓解抗癌药物抗药性及增加抗癌药物敏感性的医药组合物及其用途

摘要

本发明公开了一种具缓解抗癌药物抗药性及增加抗癌药物敏感性的医药组合物及其用途，本发明的医药组合物，其包含趋化素类似物胜肽，所述趋化素类似物胜肽选自SEQ ID NO.1；以及药剂，所述药剂选自靶向药物、载剂、佐剂、赋形剂所述中的一种或多种。相较于单独施予靶向药物，本发明医药组合物可克服抗癌药的耐药性，施用于耐药性癌症，可增加治疗癌症与抑制肿瘤生长的效果，并降低癌症治疗过程中的副作用，能更有效地治疗癌症、抑制肿瘤生长。

说明书

技术领域

本发明涉及一种医药组合物(pharmaceutical composition)，特别是一种具缓解抗癌药物抗药性及增加抗癌药物敏感性的医药组合物及其用途。

背景技术

随着全球人口的快速增长和老龄化，许多国家中，癌症为主要死亡原因且日益显着，代表全世界的癌症发病率和死亡率正在迅速增长。

抗癌治疗对于癌症治疗是必不可少的。另一方面，癌症通常会发展出对抗癌疗法的抵抗力。一旦癌细胞获得了对抗癌药的抗性，该细胞就经常显示出对在治疗中未使用的另一种抗癌药的抗性。换句话说，耐药性是癌症治疗的巨大问题。

举例而言，酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)是临床上晚期EGFR突变非小细胞肺癌患者的标准治疗方法(Sharma SV，2007)。第一代EGFR-TKI吉非替尼(Gefitinib，商品名为艾瑞莎(Iressa))将使具有激活的EGFR突变的NSCLC患者的预后得到显着改善。但是，在中位缓解期(median duration)反应12个月后，所有患者均出现了肿瘤耐药性，其中一半以上是由于EGFR T790M耐药性突变的出现(Wheeler DL，2010)。

此外，ELR-CXC趋化因子与伴随肿瘤发展的血管生成有关，其诱导机制是通过将这种类型的趋化因子(特别是指CXCL8)与内皮细胞(EC)上的CXCR1和CXCR2结合而产生的激活。目前，已证明许多不同类型的肿瘤能够分泌ELR-CXC趋化因子。例如，一种或多种ELR-CXC趋化因子被表明通过诱导癌症中的干细胞特性赋予对EGFR抑制剂的抗性(Liu YN，2015)。

不幸的是，该治疗效果并不能持续，因为肿瘤会产生对现有药物不敏感的耐药性突变。换句话说，尽管在临床实践中使用了许多不同的抗肿瘤制剂，但是它们的功效在大多数情况下是不足的，并且对这种疗法敏感的疾病范围受到限制。

因此，今日医疗领域仍然需要新的，更有效的制剂以及有效治疗和预防具有原发性和获得性抗性的肿瘤的此类组合物的开发。

有鉴于此，靶向药物并未能对癌症患者如预期的疗效，相反地又产生新形态的治疗毒性。因此解决上述缺失实为本领域的一重大课题。

发明内容

缘此，本发明目的在于提供用于克服抗药性的药剂(agent)/药物(medicament)/药物组合物(pharmaceutical composition)，或用于克服抗癌药的抗药性的药剂/药物/药物组合物。

本发明的另一方面提供了治疗癌症的方法，治疗抗药性癌症的方法以及用于治疗诸如患有抗药性癌症的受试者的癌症的药物组合物。

本发明的再另一方面提供了一种用于治疗个体癌症的方法，该方法包括对该个体给予包含一种或多种趋化因子类似物肽和一种或多种药物的联合疗法。

其他实施方案提供了趋化因子类似物肽在与个体药物，靶向药物，药学上可接受的缓冲剂，稀释剂，载体，佐剂或赋形剂组合给药时用于治疗个体癌症的药物的用途；靶向药物，药学上可接受的缓冲剂，稀释剂，载体，佐剂或赋形剂在与趋化因子类似物肽联合给药时用于治疗个体癌症的药物的用途。

在如上文所述的本发明的实施例中，本发明医药组合物的用途，其是用于在制备用以治疗癌症、抑制癌细胞生长和/或抑制癌细胞转移的医药组合物中的应用。

本发明医药组合物是特别关于一种包含靶向药物(targeted drug)与趋化素类似物胜肽(多肽或肽)(chemokine analogue peptide)的组合物，可克服抗癌药的耐药性，施用于耐药性癌症及其患者，可增加治疗癌症与抑制肿瘤生长的效果，并降低癌症治疗过程中的副作用。

附图说明

图1显示RISE P-8的全长氨基酸序列和结构。

图2A-2D描述了亲代细胞(parental cells)和吉非替尼耐药细胞(Gefitinib-resistant cells)的CXCL8，CXCR1和CXCR2 mRNA表达，其中

图2A描述了PC9亲代细胞和PC9吉非替尼耐药(Gefitinib-resistant,GR)细胞之间的IL-8mRNA表达水平；

图2B描述了HCC827亲代细胞和HCC827吉非替尼耐药(Gefitinib-resistant,GR)细胞之间的IL-8 mRNA表达水平；

图2C描述了PC9亲代细胞和PC9吉非替尼耐药细胞之间的CXCR1 mRNA和CXCR2mRNA表达；

图2D描述了HCC827亲代细胞和HCC827吉非替尼耐药细胞之间的CXCR1 mRNA和CXCR2 mRNA表达。

图3A-3B说明了通过吉非替尼给药后亲代细胞和耐吉非替尼的细胞的IL-8 mRNA表达。其中，图3A与图3B中的0HR即为0小时，4HR即为4小时，24HR即为24小时，其中

图3A为描述了HCC827亲代细胞通过吉非替尼处理的IL-8 mRNA表达水平；

图3B为描述了HCC827吉非替尼耐药细胞通过吉非替尼处理的IL-8 mRNA表达水平。

图4A-4D说明了通过吉非替尼给药后亲代细胞和吉非替尼耐药细胞的CXCR1和CXCR2 mRNA表达。其中，图4A-4D中的0HR即为0小时，4HR即为4小时，24HR即为24小时，其中

图4A为描述了HCC827亲代细胞通过吉非替尼处理的CXCR1 mRNA表达水平；

图4B为描述了HCC827亲代细胞通过吉非替尼处理的CXCR2 mRNA表达水平；

图4C为描述了HCC827吉非替尼耐药细胞通过吉非替尼处理的CXCR1 mRNA表达水平；

图4D为描述了HCC827吉非替尼耐药细胞通过吉非替尼处理的CXCR2 mRNA表达水平。

图5是RISE P-8通过CXCL8拮抗人类嗜中性粒细胞反应的图示。

图6A-6B显示了在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的3D(悬浮，suspended)条件下IL-8，CXCR1和CXCR2的基因表达增加，其中

图6A为描述了PC9亲代细胞于悬浮(3D)培养与粘附(2D)培养之间的IL-8mRNA、CXCR1 mRNA和CXCR2 mRNA表达；

图6B为描述了PC9吉非替尼耐药细胞于悬浮(3D)培养与粘附(2D)培养之间的IL-8mRNA、CXCR1 mRNA和CXCR2 mRNA表达。

图7A-7B是RISE P-8在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的3D(悬浮)条件下显着降低IL-8蛋白表达的图示，其中

图7A为描述了PC9亲代细胞通过利用/不利用RISE P-8处理于悬浮(3D)培养与粘附(2D)培养之间的IL-8蛋白分泌表达；

图7B为描述了PC9吉非替尼耐药细胞通过利用/不利用RISE P-8处理于悬浮(3D)培养与粘附(2D)培养之间的IL-8蛋白分泌表达。

图8A-8D描绘吉非替尼耐药细胞通过施予吉非替尼与吉非替尼联合RISE P-8相比的CXCR1，CXCR2和CXCL8基因的表达水平，其中

图8A为PC9吉非替尼耐药细胞通过施予/不施予吉非替尼处理的IL-8 mRNA、CXCR1mRNA和CXCR2 mRNA表达；

图8B为HCC827吉非替尼耐药细胞通过施予/不施予吉非替尼处理的IL-8mRNA、CXCR1 mRNA和CXCR2 mRNA表达；

图8C为PC9吉非替尼耐药细胞通过施予吉非替尼与吉非替尼联合RISE P-8处理的IL-8mRNA、CXCR1 mRNA和CXCR2 mRNA表达；

图8D为HCC827吉非替尼耐药细胞通过施予吉非替尼与吉非替尼联合RISE P-8处理的IL-8mRNA、CXCR1 mRNA和CXCR2 mRNA表达。

图9A-9B显示了吉非替尼耐药(Gefitinib-resistant)非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的细胞周期通过RISE P-8而阻滞在G0/G1期，其中

图9A为HCC827吉非替尼耐药细胞通过不施予药物处理、施予吉非替尼处理、施予吉非替尼联合RISE P-8处理的G0/G1期百分比；

图9B为PC9吉非替尼耐药细胞通过不施予药物处理、施予吉非替尼处理、施予吉非替尼联合RISE P-8处理的G0/G1期百分比。

图10A-10B说明当通过施予IL-8或不施予IL-8处理时，RISE P-8可以抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌细胞的锚定非依赖性增殖速率(anchorage-independentproliferation rate)，其中

图10A为PC9吉非替尼耐药细胞于对照组、IL-8组、IL-8+RISE P-8组、RISE P-8组的细胞增殖率；

图10B为HCC827吉非替尼耐药细胞于对照组、IL-8组、IL-8+RISE P-8组、RISE P-8组的细胞增殖率。

图11A-11B说明了RISE P-8可以抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌细胞的长期生长，其中

图11A为PC9吉非替尼耐药细胞于对照组、IL-8组、IL-8+RISE P-8组、RISE P-8组的集落形成率；

图11B为HCC827吉非替尼耐药细胞于对照组、IL-8组、IL-8+RISE P-8组、RISE P-8组的集落形成率。

图12A-12B说明了RISE P-8可以抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的侵袭能力(invasion ability)，其中

图12A为PC9吉非替尼耐药细胞于对照组、IL-8组、IL-8+RISE P-8组、RISE P-8组的侵袭率；

图12B为HCC827吉非替尼耐药细胞于对照组、IL-8组、IL-8+RISE P-8组、RISE P-8组的侵袭率。

图13A-13B说明了RISE P-8可以抑制在刘易斯肺癌细胞(Lewis Lung carcinomacells)中的侵袭能力，其中

图13A为刘易斯肺癌细胞于对照组、IL-8组、IL-8+RISE P-8组、RISE P-8组的侵袭率；

图13B为刘易斯肺癌细胞于对照组、MIP-2组、MIP-2+RISE P-8组、RISE P-8组的侵袭率。

图14A-14D说明了通过RISE P-8和吉非替尼的联合使用抑制肿瘤生长并延长活体(in vivo)寿命，其中

图14A为荷瘤小鼠通过施予磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline，PBS)处理、施予RISE P-8处理的肿瘤体积；

图14B为荷瘤小鼠通过施予吉非替尼处理、施予吉非替尼联合RISE P-8处理的的肿瘤体积；

图14C为荷瘤小鼠通过施予吉非替尼处理、施予吉非替尼联合RISE P-8处理的的肿瘤重量；

图14D为通过施予磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline，PBS)处理、施予RISE P-8处理、施予吉非替尼处理、施予吉非替尼联合RISE P-8处理的存活率。

图15A-15C显示了RISE P-8和吉非替尼的联合使用减弱了活体体内肿瘤IL-8，CXCR1和CXCR2 mRNA的表达，其中

图15A为牺牲(sacrificed)荷PC9GR瘤的BALB/c裸鼠后，在“吉非替尼”组和“吉非替尼+RISE P-8组”中检查肿瘤组织的IL-8mRNA表达；

图15B为牺牲(sacrificed)荷PC9GR瘤的BALB/c裸鼠后，在“吉非替尼”组和“吉非替尼+RISE P-8组”中检查肿瘤组织的CXCR1 mRNA表达；

图15C为牺牲(sacrificed)荷PC9GR瘤的BALB/c裸鼠后，在“吉非替尼”组和“吉非替尼+RISE P-8组”中检查肿瘤组织的CXCR2 mRNA表达。

具体实施方式

以下定义旨在阐明但不限制所定义的术语。如果没有特别定义在此使用的特定术语，则不应认为该术语是不确定的。术语是本领域技术人员在其可接受的含义内使用的。

如本文所用，术语“药物组合物(pharmaceutical combination)”或“组合物(combination)”是指治疗剂的联合施用，所述治疗剂可以是趋化因子类似物肽或/与靶向药物组合物。在本发明的上下文中，治疗剂包括趋化因子类似物肽或/和与靶向药物组合物的趋化因子类似物肽，其可以同时或在时间间隔内独立施用，使得这些时间间隔可使组合伴侣(combination partners)表现出协同作用。

如本文所用，术语“协同(synergistic)”或“协同作用(synergistic effect)”是指用本发明的组合和/或通过本发明的治疗癌症的方法获得的治疗作用，其大于单独或单独使用趋化因子类似物肽和靶向药物所产生的效果之和。治疗剂之间的这种协同作用可使用较小剂量的一种或两种治疗剂，在相同剂量下提供更大的功效，以及/或者防止或延迟耐药性的建立。可以透过共同配制在本文所述的药物组合或组合物中的治疗剂或通过单位剂型或作为同时或相继施用的单独制剂同时施用所述治疗剂来实现协同作用。

如本文所用，术语“治疗有效量(therapeutically effective amount)”是指趋化因子类似物肽或/与靶向药物组合的量，其在患有癌症的特定患者(受试者/个体/subject)中有效地产生期望的治疗反应。特别地，术语“治疗有效量”包括治疗剂的量，其在给药时将实现期望的治疗效果。在本发明的上下文中，期望的治疗效果包括部分或全部抑制、延迟或预防癌症的进展，包括癌症转移、抑制、延迟或预防癌症的复发，亦包括癌症转移和/或预防受试者中癌症的发作或发展。关于在合理的医学判断范围内的治疗剂治疗量，即趋化因子类似物肽或/与靶向药物组合，需考虑用于治疗受试者的每种治疗剂的量应足够低，以避免不预期的或严重的副作用。组合使用时，治疗有效量将随患者的年龄和身体状况、癌症的严重程度、治疗的持续时间，以及任何其他同时治疗的性质，或者因用于治疗的治疗剂和其他相关因素的药物组合物中的特定药学上可接受的载体的具体类型而异。

如本文所用，术语“受试者(个体/subject)”是指动物，特别是哺乳动物，更特别是人类。本文所用的术语“哺乳动物”是指“哺乳动物”类别的温血脊椎动物，包括人类。术语哺乳动物包括诸如猫、狗、兔、牛、马、绵羊、山羊、猴子、小鼠、大鼠、沙鼠、豚鼠、猪和人的动物。术语“受试(者”可以与术语“患者”互换使用。在本发明的上下文中，“所需个体(a subjectin need thereof)”是指需要治疗癌症的受试者。或者，“所需个体(a subject in needthereof)”是指被诊断出患有癌症的受试者(患者)。

如本文所用，“治疗(Treating/treatment)”是指在受试者/患者例如哺乳动物(特别是人或伴侣动物)中治疗或治疗疾病或医学状况(例如癌症(cancer)，肿瘤(tumor)，赘生物(neoplasm)状况)；其中包括改善疾病或医学状况，即消除或导致受试者/患者的疾病或医学状况消退；抑制疾病或医学状况，即减慢或阻止受试者/患者中疾病或医学状况的发展；或减轻受试者/患者的疾病或医疗状况的症状。

如本文所用，术语“药学上可接受的(pharmaceutically acceptable)”是指组合物中使用的载体、稀释剂、赋形剂和/或盐类应与制剂的其他成分兼容，并且对其接受者无害。“药学上可接受的”还表示该组合物或剂型在合理的医学判断范围内，与之相当的受试者，例如动物或人体内，适用于没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，具有合理的收益/风险比(benefit/risk ratio)。

“临床益处(clinical benefit)”是指由医生和/或临床医生使用的治疗癌症的术语，该术语涵盖受试者/患者在治疗期间遇到的任何感知的益处。如本文所述，该术语包括但不限于一种或多种临床益处：肿瘤尺寸减小、肿瘤生长抑制或降低、延迟进展时间、无新的肿瘤或病变、减少新的肿瘤形成、个体生存期增加或个体肿瘤无进展且无转移而其生存期增加。

根据一个方面，本发明提供了一种用于减轻抗癌药耐药性并增强抗癌药敏感性的药物组合物，其至少包含趋化因子类似物肽。另外，药物组合物还包含靶向药物。

任选地，在本发明的示例性实施方案中，本发明的趋化因子类似物肽包括但不限于RISE P-8(SEQ ID NO：1)。

根据本发明使用的RISE P-8的序列(SEQ ID NO：1)如下所示：

SEQ ID NO：1：

GSKELRCQCIRSYSKPFHPKFIKELRVIPASQFCANTEIIVKLSDGRELCLDPKENWVQRVVEKFLKRAENS

此外，RISE P-8被设计为CXCL8(IL-8)的类似蛋白，并成为CXCR1和CXCR2的拮抗剂。RISE P-8的完整氨基酸序列和蛋白质结构如图1所示。

在本发明一个实施方案中，RISE P-8直接与IL-8(CXCL8)结合，从而抑制IL-8与其受体CXCR1和CXCR2的结合。

在另一个实施方案中，药物组合物还包含药物，其中该药物包含靶向药物，药学上可接受的缓冲剂(buffer)、稀释剂(diluent)、载体(carrier)、佐剂(adjuvant)或赋形剂(excipient)。

本发明的上述靶向药物包括用于细胞表面受体(或抗原)的抗体(antibody forcell surface receptor(or antigen))、信号通路小分子抑制剂(small moleculeinhibitors of signaling pathway)、mTOR信号通路抑制剂(mTOR signaling pathwayinhibitor)、抗血管生成剂和蛋白酶体抑制剂(anti-angiogenic agent and proteasomeinhibitors)。优选地，靶向药物是信号通路小分子抑制剂(small molecule inhibitorsof signaling pathway)。

细胞表面受体(或抗原)的抗体包括但不限于抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗(Rituximab,Mabthera)、抗HER2/neu抗体曲妥珠单抗(Trastuzumab,赫赛汀,Herceptin)和抗HER1/EGFR抗体西妥昔单抗(Cetuximab,Erbitux)。

信号通路小分子抑制剂(small molecule inhibitors of signaling pathway)中，包括但不限于：表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factorreceptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)(例如吉非替尼(gefitinib)、达沙替尼(dasatinib)、厄洛替尼(erlotinib,Tarceva)、伊马替尼(imatinib)、尼洛替尼(Nilotinib,Tasigna)、拉帕替尼(lapatinib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、阿法替尼(afatinib、奥西替尼(osimertinib,TAGRISSO)和/或其衍生物)、酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine Kinase Inhibitors,TKIs)(例如伊马替尼(imatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、达沙替尼(dasatinib)、帕唑帕尼(Pazopanib,VOTRIENT))。

抗血管生成剂包括但不限于抗VEGF抗体，例如阿瓦斯汀(Avastin,贝伐单抗，Bevacizumab)，血管内皮生长因子受体(VEGFR)抑制剂(例如索拉非尼(Sorafenib)，舒尼替尼(Sunitinib)，凡德他尼(Vandetanib))。

mTOR信号通路抑制剂包括但不限于特罗罗莫司(Temsirolimus)和依维莫司(Everolimus)。

蛋白酶体抑制剂包括但不限于:硼替佐米(bortezomib、卡非佐米(carfilzomib)、马利佐米(marizomib)、依沙佐米(ixazomib)、奥普佐米(oprozomib)和地兰佐米(delanzomib)。

趋化因子类似物肽与靶向药物之间的重量比、体积比和浓度比没有特别限制。本领域技术人员可以根据疾病选择趋化因子类似物肽与靶向药物之间的合适比例，特别是当趋化因子类似物肽与靶向药物结合时，可以发挥协同作用。在一个实施方案中，趋化因子类似物肽可以每周1～3次、每次500～0.01毫克/公斤(mg/kg)体重施予所需个体。

另外，本发明提供了用于减轻抗癌药耐药性和增强抗癌药敏感性的药物组合物的用途，以及用于治疗癌症，抑制癌细胞生长和/或抑制癌细胞转移的药物组合物。本发明的药物组合物可以抑制受试者的血管生成相关疾病或血管生成依赖性疾病。与血管生成有关的疾病或与血管生成有关的疾病包括但不限于血管侵袭和异常细胞增殖，例如血管生成、肿瘤或癌症。本发明中的癌症包括但不限于胸部癌(chest cancer)、腹部癌(abdominalcancer)、胃肠道癌(gastrointestinal cancers)、头颈癌(head and neck cancer)、脑癌(brain cancer)、内分泌癌(endocrine cancer)、泌尿系统癌(urologic cancer)男性生殖系统肿瘤(male reproductive system neoplasm)、妇科癌(gynecologic cancer)、血液癌(blood cancer)、皮肤癌(skin cancer)和肉瘤(sarcoma)。

胸部癌选自肺癌，包括小细胞肺癌(Small cell lung cancer，SCLC)和/或非小细胞肺癌(Non-Small cell lung cancer，NSCLC)。非小细胞肺癌(NSCLC)可以选自肺腺癌(pulmonary adenocarcinoma)、鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma)和/或大细胞癌(large cell carcinoma)。小细胞肺癌(SCLC)可以选自小细胞癌和混合的小细胞/大细胞癌或合并的小细胞肺癌。

腹部癌包括但不限于肝癌(liver cancer)、结肠直肠癌(colorectal cancer)、胰腺癌(pancreatic cancer)、肾癌(kidney cancer)、肾细胞癌，renal cell cancer)、胃癌(stomach cancer，gastric cancer)、肾上腺皮质癌(adrenocortical cancer)、原发性腹膜癌(primary peritoneal cancer)、腹膜间皮瘤(peritoneal mesothelioma)。

胃肠道癌症包括但不限于食道癌(esophageal cancer)、胃癌(stomach cancer，gastric cancer)、肝癌(liver cancer，肝细胞癌，hepatocellular carcinoma)、胆囊和胆道癌(gallbladder&biliary tract cancer)、胰腺癌(pancreatic cancer)、结肠直肠癌(colorectal cancer)、小肠癌(small bowel cancer)和肛门癌(anal cancer)。

头颈癌包括但不限于喉和下咽癌(laryngeal and hypopharyngeal cancer)、鼻腔和鼻旁窦癌(nasal cavity and paranasal sinus cancer)、鼻咽癌(nasopharyngealcancer)、口腔和口咽癌(oral and oropharyngeal cancer)以及唾液腺癌(salivarygland cancer)。

脑肿瘤的类型包括原发性脑瘤或继发性脑瘤。脑肿瘤包括但不限于星形细胞瘤(astrocytoma)、胶质母细胞瘤(glioblastoma)、髓母细胞瘤(medulloblastoma)、少突胶质细胞瘤(oligodendroglioma)、神经胶质瘤(glioma)和脑转移瘤(brain metastases)。

内分泌癌包括但不限于肾上腺肿瘤(adrenal tumors)、神经内分泌肿瘤(neuroendocrine tumors)、甲状旁腺肿瘤(parathyroid tumors)、垂体瘤(pituitarytumors)和甲状腺疾病(thyroid disorders)。

泌尿科癌症包括但不限于膀胱癌(bladder cancer)和尿道癌(urethralcancer)。

男性生殖系统肿瘤包括但不限于前列腺癌(prostate carcinoma)、阴茎癌(penile carcinoma)、睾丸精原细胞瘤(testicular seminoma)和睾丸胚胎癌(testicularembryonal carcinoma)。

妇科癌症包括但不限于子宫颈癌(cervical cancer)、卵巢癌(ovarian cancer)、子宫癌(uterine cancer)、子宫内膜癌(endometrial cancer)、阴道癌(vaginal cancer)和外阴癌(vulvar cancer)。

血液癌症包括但不限于白血病(leukemia)、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)和多发性骨髓瘤(multiple myeloma)。

皮肤癌包括但不限于基底细胞皮肤癌(basal cell skin cancer)、鳞状细胞皮肤癌(squamous cell skin cancer)、黑素瘤皮肤癌(melanoma skin cancer)和默克尔细胞皮肤癌(Merkel cell skin cancer)。

肉瘤包括但不限于软组织肉瘤(soft tissue sarcoma)、骨肉瘤(osteosarcoma，bone sarcoma)和横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)。

肿瘤或/和癌症还包括但不限于乳癌(breast cancer)和神经母细胞瘤(neuroblastoma)。

在一实施方案中，趋化因子类似物肽或/与靶向药物组合可以通过常规给药途径给药，包括但不限于口服，血管内、真皮内、透皮、肌内、腹膜内、肿瘤内、肠胃外、鼻、直肠、舌下、局部、气溶胶或气管内。

在一实施方案中，趋化因子类似物肽和/或一种或多种靶向药物可以以适合口服给药的形式给药，例如片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、颗粒剂、散剂、扁囊剂、乳剂、胶囊、糖浆、酏剂等。

在另一实施方案中，趋化因子类似物肽和/或一种或多种靶向药物可以肠胃外施用，例如通过肌肉内、鞘内、皮下、腹膜内、静脉推注或静脉内输注。肠胃外给药可以通过将趋化因子类似物肽和/或靶向药物掺入溶液或悬浮液中来完成。

在又一实施方案中，趋化因子类似物肽和/或一种或多种靶向药物可以以包含所述趋化因子类似物肽和/或一种或多种靶向药物的药物组合物的形式给药，以及至少一种药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。

该药物组合物包含趋化因子类似物肽和/或至少一种靶向药物和一种或多种药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。为了生产丸剂、片剂、包衣片剂和明胶硬胶囊，可以使用的药物活性赋形剂包括但不限于乳糖，玉米淀粉或其衍生物、阿拉伯树胶、氧化镁或葡萄糖等。胶囊和栓剂方面，可以使用的载体包括但不限于脂肪、蜡、天然或硬化油等。用于制备溶液的合适载体是例如注射溶液，或用于乳剂或糖浆，例如纯水、生理氯化钠溶液(physiological sodium chloride solution)或醇，例如乙醇、丙醇或甘油；糖溶液，例如葡萄糖溶液或甘露醇溶液，或已提及的各种溶剂的混合物。药物组合物中使用的药学上可接受的稀释剂，赋形剂或载体可以是常规已知的药学上可接受的稀释剂，赋形剂或载体，其可以根据趋化因子类似物肽和/或靶向药物的剂型和给药途径进行选择。

通常，可以根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法来制备用于药物用途的组合物。

本文所述的组合物可以是适合口服给药的形式，如固体剂型，例如片剂、胶囊剂、锭剂或颗粒剂；例如片剂、胶囊剂、锭剂或颗粒剂。液体剂型，例如乳剂、溶液剂、混悬剂；用于肠胃外注射(包括静脉内，皮下，肌内，血管内或输注)，例如无菌溶液、悬浮液或乳剂；用于局部给药，例如作为软膏、乳霜、凝胶或乳液。

口服给药的组合物可以是片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、颗粒剂、散剂、扁囊剂、乳剂、胶囊剂、糖浆剂或酏剂的形式；适用于口服给药的组合物可包括标准媒介物；此载体优选是药物级的。

对于软膏和乳膏，可以将活性成分(趋化因子类似物肽和/或靶向药物)制成水包油或油包水基质。

对于肌内、腹膜内、皮下和静脉内使用，通常使用活性成分(趋化因子类似物肽和/或靶向药物)的无菌溶液，并且溶液的pH值应适当调节(adjusted)和缓冲(buffered)。

此外，通过适当的制剂，可以延迟或延长趋化因子类似物肽和/或药物组合物中包含的靶向药物的抗癌作用。

尽管用于施用的趋化因子类似物肽和/或靶向药物的有效剂量，会根据疾病(癌症)的严重程度，以及症状的严重程度、年龄、性别，体重和受试者的敏感性差异而变化。其给药方式、时间、间隔和持续时间，制剂的性质和类型等不改变。在某些实施方案中，趋化因子类似物肽和/或一种或多种靶向药物可以一次给药。本领域技术人员将能够通过确定所施用的治疗剂的半衰期来确定这样的时间范围。如前所述，在根据本发明的药物组合和/或治疗癌症的方法和/或用于治疗癌症的用途中，趋化因子类似物肽和一种或多种靶向药物可以同时给药或前后使用，以及以任何顺序而顺序使用。在另一个实施方案中，可以以一种药物的峰值药代动力学作用与另一种药物的峰值药代动力学作用相一致的方式施用趋化因子类似物肽和一种或多种靶向药物。

然而，本发明的趋化因子类似物肽或/和靶向药物可替代地与一种或多种另外的癌症治疗组合使用。例如，趋化因子类似物肽或/和靶向药物可以与一种、两种、三种、四种、五种或更多种其他癌症治疗组合使用。

通过“组合”，本发明包括将药物组合物施用于在相同疗法中接受一种或多种其他癌症治疗的受试者。因此，该术语不仅涵盖药物组合物与一种或多种其他癌症治疗(例如，推注剂量或输注)的同时施用，而且涵盖这些癌症治疗的时间上分开的施用。例如，药物组合物可以在患者肿瘤科医生定义的治疗计划/周期内施用，包括一种或多种其他癌症治疗，取决于多种因素中的任何一种，在药物组合物之前、同时或之后施用，例如症状的严重程度等。

在另一个实施方案中，用于治疗特定癌症的趋化因子类似物肽或/和靶向药物的治疗有效量取决于癌症的类型和性质，其大小，进展和转移状态，并且应该确定与主管医师协商。

例如，在一些实施方案中，本发明的药物组合物每月一次、每月两次、每月三次、隔周一次、每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、每周一次给药、每周五次、每周六次、隔天一次、每天一次、一天两次或一天三次。

尽管所用药物组合物的剂量将根据特定趋化因子类似物肽的活性和所治疗的病症而变化，但通过指导的方式指出，剂量范围为每人每次0.01至500mg/kg每剂量的体重，特别是在每剂量0.02至1mg/kg体重的范围内。另一方面，该剂量方案可以持续进行多长时间，但是对于所讨论的患者而言是合适的，如果需要的话，将每日剂量分成数次而分开给药。

趋化因子类似物肽给药的代表性的非限制性可接受剂量是约0.01毫克/公斤(mg/kg)至约500毫克/公斤(mg/kg)受试者(患者)体重，每周一次至三次。

吉非替尼给药的代表性非限制性可接受剂量是每天一次约250毫克/公斤(mg/kg)受试者(患者)体重。

奥西替尼(TAGRISSO)给药的代表性非限制性可接受剂量是每天一次约80毫克/公斤(mg/kg)受试者(患者)体重。

阿法替尼给药的代表性的非限制性可接受剂量是每天一次约40毫克/公斤(mg/kg)受试者(患者)体重。

厄洛替尼(Tarceva)给药的代表性非限制性可接受剂量是每天一次约150毫克/公斤(mg/kg)受试者(患者)体重。

对于Mabthera(利妥昔单抗)给药，代表性的非限制性可接受剂量为每剂体表面积约90mg/m

赫赛汀(曲妥珠单抗)给药的代表性非限制性可接受剂量为每周约2毫克/公斤(mg/kg)受试者(患者)体重。

口服VOTRIENT(Pazopanib)的代表性非限制性可接受剂量是每天一次约800毫克/公斤(mg/kg)受试者(患者)体重。

伊马替尼给药的代表性的非限制性可接受剂量是每天约400毫克/公斤(mg/kg)至约800mg/kg受试者(患者)体重。

尼洛替尼(Tasigna)给药的代表性非限制性可接受剂量为每天约400毫克/公斤(mg/kg)至约800毫克/公斤(mg/kg)受试者(患者)体重。

在一个实施方案中，已经在某些测定系统和体外几种不同的给药方案中评价了本发明提供的组合。实验细节如下文所提供。本文呈现的数据清楚地表明趋化因子类似物肽，特别是RISE P-8，当与靶标药物组合时表现出协同作用。此外，在一个实施方案中，受试者达到临床益处。

本发明的其他特定实施例包括但不限于以下：

实施例

实施例1、

细胞系(cell lines)使用的是Lewis肺癌(LL/2)是一种从C57BL小鼠的肺中建立的细胞系，该小鼠患有原发性Lewis肺癌的植入所致的肿瘤。这种肺癌细胞系在37℃，5％CO

将人类NSCLC细胞系PC9，耐吉非替尼的PC9(PC9GR)，HCC827和耐吉非替尼的HCC827(HCC827GR)维持在RPMI 1640培养基中，该培养基补充了10％的胎牛血清、1％的青霉素-链霉素和1％的L-谷氨酰胺，培养在37℃，且具有5％CO

实施例2、CXCR1，CXCR2和CXCL8基因表达水平的定量

使用RNA提取试剂(REzolTM C&T，Protech Technology Enterprise Co.，)从细胞中提取总RNA，并使用分光亮度计(Nanodrop 1000，Thermo Scientific)进行定量。使用PrimeScript RT试剂盒(Perfect Real Time,RR037A，TAKARA Bio，日本)并根据用户手册合成单链cDNA。

所有实时PCR反应均通过StepOnePlus

实施例3、验证吉非替尼耐药(Gefitinib-resistant)的癌细胞系(cancer celllines)

为了验证耐吉非替尼的NSCLC细胞系的建立，利用吉非替尼浓度梯度应用于亲代细胞(parental cells)和吉非替尼耐药细胞并通过MTT测试，吉非替尼耐药系细胞的耐药性比亲代细胞高100-1000倍(表1)。与PC9GR细胞中的92.43μM(154倍耐药性)相比，吉非替尼在PC9细胞中的IC50值为0.6009μM。吉非替尼在HCC827细胞中的IC50值为0.056μM，而在HCC827GR细胞中为125.5μM(抗性为1517倍)。

表1.吉非替尼在亲代细胞(parental cells)和吉非替尼耐药细胞系中的细胞毒性

实施例4、吉非替尼耐药癌细胞系与亲代癌细胞系于施予吉非替尼或无施予吉非替尼的CXCL8，CXCR1和CXCR2基因的表达水平比较如图2A-2D，图2A显示了PC9亲代细胞和PC9吉非替尼耐药(Gefitinib-resistant,GR)细胞之间的IL-8mRNA表达几乎相同或没有显着差异，图2B显示了HCC827亲代细胞和HCC827吉非替尼耐药(Gefitinib-resistant,GR)细胞之间的IL-8mRNA表达几乎相同或没有显着差异。但是，与亲代细胞相比，PC9吉非替尼耐药(GR)细胞(图2C)和HCC827吉非替尼耐药(GR)细胞(图2D)的CXCR1 mRNA和CXCR2mRNA表达分别显着提高了近10至50倍。图中数据通过学生t检验(student’s t-test)并显示为平均值±SD，*P<0.05；***P<0.001。

此外，本发明还说明了通过吉非替尼刺激的HCC827细胞和HCC827GR细胞的IL-8mRNA表达。数据显示，吉非替尼治疗后，HCC827细胞并未明显诱导IL-8 mRNA表达(图3A)。相反，通过吉非替尼(5μM)处理24小时后，HCC827GR细胞的IL-8mRNA表达增加(图3B)。

类似地，通过吉非替尼刺激的HCC827和HCC827GR的CXCR1和CXCR2 mRNA表达的数据显示，在吉非替尼处理后，HCC827细胞中没有明显诱导CXCR1和CXCR2 mRNA表达(图4A和图4B)。相反，在24小时后通过吉非替尼(5μM)处理后，HCC827GR细胞的CXCR1和CXCR2mRNA表达增加(图4C和图4D)。

实施例5、RISE P-8通过CXCL8影响人类嗜中性粒细胞(neutrophil)趋化性

如图5，使用改良的Boyden chamber实验(trans-well小室迁移检测实验)的微化学趋化测定法(microchemotaxis assays)评估中性粒细胞趋化性。单独将CXCL8或同时将RISE P-8与CXCL8结合放在Boyden chamber的下部隔室中，并将纯化的嗜中性粒细胞(neutrophil)置于上部隔室中，迁移的嗜中性粒细胞通過溶解并检测。评估嗜中性粒细胞迁移的百分比，并显示趋化性指数(Chemotaxis Index，CI)值。也就是说，CI＝(强度

实施例6、吉非替尼耐药癌细胞系与亲代癌细胞系于不依赖锚定的情况下存活的CXCR1、CXCR2和CXCL8基因的表达水平比较

PC9细胞(图6A)和PC9GR细胞(图6B)显示于悬浮(3D)培养中IL-8(CXCL8)mRNA、CXCR1 mRNA、CXCR2 mRNA表达相较于粘附(2D)培养中增强。因此，对于癌细胞的存活和生长，CXCL8 mRNA、CXCR1 mRNA和CXCR2 mRNA的表达在粘附情况和悬浮情况之间显示出不同。

实施例7、RISE P-8可以显着降低NSCLC癌细胞悬浮(3D)状态下的IL-8蛋白表达

细胞经过16-18小时的无血清处理，之后以10

实施例8、吉非替尼耐药癌细胞于施予吉非替尼或通过结合施予吉非替尼与RISEP-8的CXCR1、CXCR2和CXCL8基因的表达水平比较

通过5μM吉非替尼治疗吉非替尼耐药癌细胞24小时，PC9GR细胞(图8A)和HCC827GR细胞(图8B)IL-8mRNA、CXCR1 mRNA和CXCR2 mRNA表达显着增强。但是，吉非替尼耐药癌细胞通过结合施予吉非替尼与RISE P-8(200ng/mL)处理，PC9GR细胞(图8C)和HCC827GR细胞(图8D)的IL-8 mRNA、CXCR1 mRNA和CXCR2 mRNA表达降低。图中数据通过学生t检验(student’st-test)并显示为平均值±SD，*<0.05；**P<0.01；***P<0.001。也就是说，RISE P-8可以与IL-8竞争并减弱其反馈以而调降节IL-8、CXCR1和CXCR2的基因表达。

实施例9、吉非替尼耐药癌细胞通过施予RISE P-8而被阻滞在G0/G1期

将癌细胞用5μM吉非替尼或/和RISE P-8(200ng/mL)或/和CXCL8(100ng/mL)处理24小时，然后收集细胞并在75％冰冷的乙醇中固定20℃过夜。之后再通过固定并清洗，用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色的癌细胞通过流式细胞仪和FlowJo 7.6.1分析癌细胞的细胞周期，以进行数据采集和分析。本发明通过实验验证了HCC827GR细胞(图9A)和PC9GR细胞(图9B)的细胞周期停滞在G0/G1期。

进一步言，如图9A和图9B，通过结合施予吉非替尼与RISE P-8处理的癌细胞的细胞周期相较于单独施予吉非替尼的癌细胞的细胞周期，前述通过结合施予吉非替尼与RISEP-8处理的癌细胞其总体细胞G0/G1期的百分比更为显着地被抑制。图9A和图9B数据通过学生t检验(student’s t-test)其数据显示为平均值±SD，*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。换言之，PC9GR细胞通过RISE P-8处理可以显着增加细胞停滞于G0/G1。即，本发明推断通过结合施予吉非替尼与RISE P-8可触发细胞凋亡并减少细胞增殖。

实施例10、RISE P-8可抑制吉非替尼耐药癌细胞的锚定非依赖性细胞增殖率

使用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)(Dojindo，熊本，日本)进行细胞增殖测定。吉非替尼耐药癌细胞通过结合施予吉非替尼(5μM)与RISE P-8(200ng/mL)处理24小时。亦或，吉非替尼耐药癌细胞通过结合施予吉非替尼(5μM)、RISE P-8(200ng/mL)与IL-8(100ng/mL)处理24小时。

PC9GR细胞(图10A)和HCC827GR细胞(图10B)与对照组(control group)和IL-8组(图10A和图10B)相比，吉非替尼耐药癌细胞的细胞增殖率显着降低。图中数据通过学生t检验(student’s t-test)其数据显示为平均值±SD，*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。这些数据进一步证实了癌细胞通过结合施予吉非替尼与RISE P-8能导致CXCL8，CXCR1和CXCR2的下调。

实施例11、RISE P-8可抑制吉非替尼耐药癌细胞的长期生长

另一方面，吉非替尼耐药癌细胞分别通过结合施予吉非替尼(5μM)与RISE P-8(200ng/mL)处理，亦或通过结合施予吉非替尼、RISE P-8与IL-8(100ng/mL)，亦或通过结合施予吉非替尼与IL-8后进行集落形成试验以评估细胞增殖。

结果表明，长期而言，在PC9GR细胞(图11A)和HCC827GR细胞(图11B)中，用RISE P-8处理的细胞的集落形成速度明显慢于对照组(control group)和IL-8组。图中数据通过学生t检验(student’s t-test)其数据显示为平均值±SD，*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

实施例12、RISE P-8可抑制吉非替尼耐药肺腺癌细胞(Lung Adenocarcinomacells)的侵袭能力

细胞的侵袭能力通过使用8μm孔径的transwell(Corning Fluoro Blok

待测细胞样品方面，吉非替尼耐药癌细胞分别通过结合施予吉非替尼(5μM)与RISE P-8(200ng/mL)处理，亦或通过结合施予吉非替尼、RISE P-8与IL-8(100ng/mL)，亦或通过结合施予吉非替尼与IL-8后而用于进行侵袭能力测定。

膜滤器入侵检测(transwell invasion assay)的结果表明，与对照组相比，RISEP-8在PC9GR细胞组(图12A)和HCC827GR细胞组(图12B)中降低了细胞入侵率。也就是说，如图12A所示，于PC9GR细胞实验中，“IL-8+RISE P-8组”相较“IL-8组”更能显着防止吉非替尼耐药癌细胞的侵袭率。同样地，如图12B所示，于HCC827GR细胞实验中，“IL-8+RISE P-8组”相较“IL-8组”更能显着防止吉非替尼耐药癌细胞的侵袭率。图中数据通过学生t检验(student’s t-test)其数据显示为平均值±SD，*P<0.05；**P<0.01。

实施例13 RISE P-8对刘易斯肺癌细胞(Lewis肺癌细胞)侵袭能力的抑制作用

图13A和图13B显示LL/2细胞(刘易斯肺癌细胞)通过CXCL8、MIP-2或RISE P-8处理后的侵袭性。LL/2癌细胞的特性为非常容易侵入肺并迅速生长。将LL/2细胞接种到涂有基质胶(Matrigel)的聚碳酸酯滤膜(polycarbonate filters)上以分析其侵袭潜能；然后将细胞在室内温育24小时，并通过PI染色分析并在显微镜下计数。图中显示了穿透孔膜上的浸润性细胞(invasive cells)的代表性区域(放大100倍)和侵袭率(invasive rate)。LL/2细胞分别通过用CXCL8(100ng/ml)，RISE P-8(200ng/ml)或MIP-2(50ng/ml)处理。图13A-13B显示了侵袭率的定量表示。图中数据通过学生t检验(student’s t-test)其数据显示为平均值±SD，*P<0.05；**P<0.01。

相同的结果亦可在MIP-2诱导的细胞侵袭的数据中显示(图13B)。MIP-2是一种功能类似于人类CXCL8/IL-8鼠类类似同源物。RISE P-8可显着减少侵袭细胞的数量。即，本发明进一步说明了CXCL8可以激发LL/2侵袭能力，而RISE P-8显着抑制了CXCL8刺激的细胞侵袭。

实施例14、通过结合施予吉非替尼与RISE P-8可抑制活体肿瘤生长并延长活体寿命

雄性BALB/c裸鼠(5周龄)购自实验动物中心(NLAC)。将PC9GR细胞以皮下注射到BALB/c裸鼠的背部。RISE P-8(500μg/kg)通过腹腔注射，每周注射3次；吉非替尼(80mg/kg)通过每周两次口服施予；治疗后直至第72天记录荷瘤小鼠的肿瘤大小。“吉非替尼+RISE P-8组”的肿瘤大小被显着抑制(图14A-14B)。也就是说，结果显示，与“吉非替尼组”相比，通过结合施予吉非替尼与RISE P-8可显着减小肿瘤大小。并且与其它组相比，通过结合施予吉非替尼与RISE P-8至少有效地将荷瘤小鼠的寿命延长了14天以上(图14C-14D)。

实施例15、通过结合施予吉非替尼与RISE P-8可减轻活体肿瘤的IL-8RNA、CXCR1mRNA和CXCR2 mRNA表达

在第72天牺牲(sacrificed)荷PC9GR瘤的BALB/c裸鼠后，在“吉非替尼”组和“吉非替尼+RISE P-8组”中检查肿瘤组织的IL-8，CXCR1和CXCR2基因表达(图15A-15C)。图中数据通过学生t检验(student’s t-test)并显示为平均值±SD，*<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

综上，本发明所述药物组合物通过协同作用减弱肿瘤微环境中IL-8、CXCR1、CXCR2的表达，通过调降IL-8抑制肿瘤、耐药肿瘤生长，和调降IL-8阻止癌细胞、耐药癌细胞迁移和侵袭，并治疗癌细胞、耐药癌细胞转移或减少癌细胞、耐药癌细胞转移传播。此外，前述耐药癌细胞具过表达IL-8的特征。

除非另有明确说明，否则本说明书中公开的每个特征(包括任何所附权利要求、摘要和附图)可以由具有相同，等同或相似目的的替代特征代替。因此，除非另有明确说明，否则所公开的每个特征仅是等同或相似特征的示例。

以上的叙述仅为本发明解决现有问题所采用的技术手段的较佳实施例说明，然其并非用以限定本发明。举凡与本发明权利要求文义相符，或依本发明权利要求所做的均等变化与修饰，皆为本发明权利要求所涵盖。任凡熟悉于此项技艺者当可依据上述的说明而作其它种种的改良，惟这些改变仍属于本发明的发明精神及以上权利要求所界定的专利范围中。

SEQUENCE LISTING

<110> 北京锐瑟生物医药科技发展有限公司

<120> 一种具缓解抗癌药物抗药性及增加抗癌药物敏感性的医药组合物及其用途

<130> T1946

<150> US 62/927,829

<151> 2019-10-30

<160> 7

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 72

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> RISE P-8

<400> 1

Gly Ser Lys Glu Leu Arg Cys Gln Cys Ile Arg Ser Tyr Ser Lys Pro

1 5 10 15

Phe His Pro Lys Phe Ile Lys Glu Leu Arg Val Ile Pro Ala Ser Gln

20 25 30

Phe Cys Ala Asn Thr Glu Ile Ile Val Lys Leu Ser Asp Gly Arg Glu

35 40 45

Leu Cys Leu Asp Pro Lys Glu Asn Trp Val Gln Arg Val Val Glu Lys

50 55 60

Phe Leu Lys Arg Ala Glu Asn Ser

65 70

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> forward primer for CXCL8

<400> 2

gagcactcca taaggcacaa a 21

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> reverse primer for CXCL8

<400> 3

atggttcctt ccggtggt 18

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> forward primer for CXCR1

<400> 4

gaccaacatc gcagacacat 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> reverse primer for CXCR1

<400> 5

tgcttgtctc gttccacttg 20

<210> 6

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> forward primer for CXCR2

<400> 6

ggctaagcaa aatgtgatat gtacc 25

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> reverse primer for CXCR2

<400> 7

caaggttcgt ccgtgttgta 20