一种无菌环境下红豆树嫩枝扦插方法

摘要

一种无菌环境下红豆树嫩枝扦插方法，该方法插穗选择为1年生半木质化枝条，无菌扦插基质采用1/4MS培养基+活性炭1g/L+6‑BA 0.50mg/L+保水剂5g/L‑6g/L与无菌水以1:150～200的质量比例混合而成，插穗扦插到无菌扦插基质中，在无菌培养室中培养，光照强度1500‑1800lx，14h光照/10h黑暗，温度25℃±2℃，空气相对湿度70％～80％，每隔3～5天定期对无菌扦插基质表面用75％酒精喷雾1次消毒。该方法大大减少了因基质中、空气中杂菌过多，导致嫩枝插穗大面积死亡，提高了扦插生根率，提高了嫩枝插穗的利用率，降低了培育成本，提高了经济效益。

说明书

技术领域

本发明属于植物良种繁育技术领域，具体涉及红豆树嫩枝扦插繁殖的方法。

背景技术

红豆树(Ormosia hosiei Hemsl.et Wils.)是国家二级重点保护野生植物。其材质坚重，花纹别致，属红木类木材，是家具、装饰等用特种经济高档用材，由于该树种珍贵稀少，砍伐利用严重超标，导致其分布日益狭窄、数量日趋减少，野生资源基本枯竭。

红豆树繁殖有种子繁殖和扦插繁殖等，主要采用种子繁殖，但由于其开花较迟且不稳定，一般35年才开花结籽，50年以后才进入盛果期，因此种子来源和数量均难以满足需求。而目前采用的常规硬枝、嫩枝扦插技术，生根周期长、基质杂菌多，插穗易感染腐烂，未活先腐现象严重，导致生根率低，培育成本高，进而致使红豆树种苗长期紧缺，严重制约了红豆树产业发展及其木材资源的可持续利用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有红豆树常规嫩枝扦插技术中插穗容易腐烂、难生根、生根慢、生根率低、成本高等缺陷，其目的是提供一种无菌条件下红豆树嫩枝扦插的方法，以缩短生根周期、提高扦插生根活率、降低培育成本，提高红豆树种苗的市场供应能力。

为解决上述技术问题，本发明所提供一种无菌条件下红豆树嫩枝扦插方法，其特征在于，由插穗选择、插穗消毒、无菌扦插基质配制及后期管护四步骤组成，各步骤的具体操作如下：

(1)插穗选择

选择红豆树上1年生的无机械损伤和无病虫害的半木质化枝条，将采下的枝条剪成长度为8～10cm的枝段作为插穗，插穗带有2～4个芽节，并保留插穗原来1/2的健康叶片，插穗下部切口呈斜面；

(2)插穗消毒

插穗用清水冲洗，洗去表面污垢，用无菌水冲洗1～2次，用75％v/v酒精冲洗2～3次，后用1～3％w/w次氯酸钠溶液浸泡5～30min或用0.1-0.5％w/w的氯化汞溶液浸泡5～30min，取出插穗，无菌滤纸吸干表面水分后，放入超净工作台备用。

(3)无菌扦插基质配制

无菌扦插基质采用1/4MS培养基+活性炭1g/L+6-BA 0.50mg/L+保水剂5g/L-6g/L与无菌水以1:150～200的质量比例混合制作成无菌扦插基质，搅拌均匀倒入消毒后的无盖塑料容器，无菌扦插基质的深度3cm～5cm，待无菌扦插基质呈凝胶状置于超净工作台中备用；

(4)后期管护

将步骤(2)消毒好的插穗，扦插到步骤(3)所配制的无菌扦插基质中，摆放在用75％酒精消毒后的无菌培养室中，无菌培养室内：光照强度1500-1800lx，14h光照/10h黑暗，温度25℃±2℃，空气相对湿度70％～80％，每隔3～5天定期对无菌扦插基质表面用75％酒精喷雾1次消毒，当插穗生出根系后，移栽到大田。

优选地，步骤(3)无菌扦插基质配制中，无菌扦插基质采用1/4MS培养基+活性炭1g/L+6-BA 0.50mg/L+保水剂5g/L与无菌水以1:200的质量比例混合制作成无菌扦插基质，搅拌均匀倒入已经消毒的无盖塑料盒，无菌扦插基质的深度3～4cm，待无菌扦插基质呈凝胶状，置于超净工作台中备用。

优选地，步骤(4)后期管护中，将步骤(2)消毒好的插穗扦插到步骤(3)所述的无菌扦插基质中，摆放在用75％酒精消毒后的无菌培养室中，无菌培养室内：光照强度1600lx，14小时光照/10小时黑暗，每隔4天定期对无菌扦插基质表面用75％酒精喷雾1次消毒，室内温度保持在25℃±2℃，当插穗生出根系后，移栽到大田。

优选地，步骤(1)中插穗下部斜面上端靠近插穗最下面的腋芽1～2cm。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

1.本发明以无菌环境下的管护措施协同作用，仅依靠一种无菌基质进行扦插培育，相对于植物组织培养，大幅度节省了常规需要多种培养基和工序成本、简化了操作，缩短了时间，该方法25～45天就可生根，相对于常规扦插繁殖，大大减少了因扦插基质中、空气中杂菌过多，导致嫩枝插穗大面积死亡进而导致扦插失败的情况，该方法与现有技术相比，产生了预料不到的技术效果。

2、本发明通过无菌条件下嫩枝扦插的综合管护处理，扦插后的实际生根率由现有常规嫩枝扦插的58％左右提升至64％-69％，提高了扦插生根率，提高了嫩枝插穗的利用率，降低了培育成本，提高了经济效益。

3、本发明方法操作简单方便，成本低，容易实施和推广。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步说明，各实施例的地点均在浙江省龙泉市，红豆树是该市的市树，传统的龙泉宝剑的剑鞘由红豆树木材制成。各实施例所用保水剂为市售保水剂产品。以下各实施例无特殊说明的为常规方法。

实施例1

苗圃红豆树容器苗圃。

(1)插穗选择

于4月中旬，取苗圃红豆树容器苗长势一致，无病虫、无机械损伤的优质1年生容器苗20株，株高1.2m左右，地径0.7-1.5cm，去掉梢头未木质化部分，剪下半木质化枝条，将枝条剪成8～10cm枝段作为插穗，并保留插穗原来1/2的健康叶片，保留2-3个芽节，插穗下部切口呈斜面，且其斜面上端靠近最下面的腋芽1～2cm。

(2)插穗消毒

插穗先用清水冲洗3～5次，洗去表面污垢后，用无菌水冲洗1～2次，用75％v/v酒精冲洗2～3次后，用3％w/w次氯酸钠溶液浸泡20min，取出插穗，无菌滤纸吸干表面水分后，放入超净工作台备用。

(3)无菌扦插基质配制

无菌扦插基质采用1/4MS培养基+活性炭1g/L+6-BA 0.50mg/L+保水剂6g/L为基础基质与无菌水按基础基质:无菌水的质量比为1:150混合制作成无菌扦插基质，搅拌均匀倒入已经消毒的无盖塑料盒(长、宽、高分别为20cm、15cm、10cm)，无菌扦插基质的深度3～5cm，待无菌扦插基质呈凝胶状，置于超净工作台中备用；

(4)后期管护

将步骤(2)消毒好的插穗扦插到步骤(3)所述的无菌扦插基质中，摆放在用75％酒精消毒后的无菌培养室中，光照强度1800lx，14小时光照/10小时黑暗，每隔4天定期对无菌扦插基质表面用75％酒精喷雾1次消毒，室内温度保持在25℃±2℃，当插穗生出根系后，移栽到大田。

本实施例1共制作插穗60株，12个盒子，每盒5株，扦插后18天插穗开始生新叶，第20天根出现，45天时候完成实验，共计生根40株，未生根10株，死亡10株，生根率67％。

实施例2

在野外红豆树母树林

(1)插穗选择

于5月上旬，取野外红豆树母树林长势一致，无病虫、无机械损伤的优质大树(5年生)10株，取当年新生枝条20支，去掉梢头未木质化部分，剪下半木质化枝条，将枝条剪成8～10cm枝段作为插穗，并保留插穗原来1/2的健康叶片，保留2-3个芽节，插穗下部切口呈斜面，且其斜面上端靠近最下面的腋芽1～2cm。

(2)插穗消毒

插穗先用清水冲洗3～5次，洗去表面污垢后，用无菌水冲洗1～2次，用75％v/v酒精冲洗2～3次后，用0.5％w/w氯化汞(升汞)溶液浸泡25min，取出插穗，无菌滤纸吸干表面水分后，放入超净工作台备用。

(3)无菌基质配制

无菌扦插基质采用1/4MS培养基+活性炭1g/L+6-BA 0.50mg/L+保水剂5g/L为基础基质与无菌水按基础基质:无菌水的质量比为1:200混合制作成无菌扦插基质，搅拌均匀倒入已经消毒的无盖塑料盒(长宽高为20cm、15cm、10cm)，无菌扦插基质的深度3～4cm，待无菌扦插基质呈凝胶状，置于超净工作台中备用，所述保水剂与实施例1相同。

(4)后期管护

将步骤(2)消毒好的插穗扦插到步骤(3)所述的无菌扦插基质中，摆放在用75％酒精消毒后的无菌培养室中，无菌培养室内：光照强度1600lx，14小时光照/10小时黑暗，每隔4天定期对无菌扦插基质表面用75％酒精喷雾1次消毒，室内温度保持在25℃±2℃，当插穗生出根系后，移栽到大田。

本实施例2共制作插穗80株，10个盒子，每个盒中8株，扦插后25天插穗开始生叶，第28天有根出现，45天时候完成实验，共计生根55株，未生根12株，死亡13株，生根率69％。

实施例3

在农民合作社实生苗圃

(1)插穗选择

于4月下旬在合作社苗圃中，取实生苗长势一致，无病虫、无机械损伤的优质1年生红豆树苗10株，去掉梢头未木质化部分，剪下半木质化枝条，将枝条剪成8～10cm枝段作为插穗，并保留插穗原来1/2的健康叶片，保留2-3个芽节，插穗下部切口呈斜面，且其斜面上端靠近最下面的腋芽1～2cm。

(2)插穗消毒

插穗先用清水冲洗3～5次，洗去表面污垢后，用无菌水冲洗1～2次，用75％v/v酒精冲洗2～3次后，用0.3％w/w氯化汞(升汞)溶液浸泡30min，取出插穗，无菌滤纸吸干水分后放入超净工作台备用。

(3)无菌扦插基质配制

无菌扦插基质采用1/4MS培养基+活性炭1g/L+6-BA 0.50mg/L+保水剂6g/L为基础基质与无菌水按基础基质:无菌水的质量比为1:150混合制作成无菌扦插基质，搅拌均匀倒入已经消毒的无盖塑料盒(长宽高为20cm、15cm、10cm)，无菌扦插基质的深度3～5cm，待无菌扦插基质呈凝胶状，置于超净工作台中备用。所述保水剂与实施例1相同。

(4)后期管护

将步骤(2)消毒好的插穗扦插到步骤(3)所述的无菌扦插基质中，每个盒子中插入5株，摆放在用75％酒精消毒后的无菌培养室中，光照强度1700lx，14小时光照/10小时黑暗，每隔4天定期对无菌扦插基质表面用75％酒精喷雾1次消毒，室内温度保持在25℃±1℃，当插穗生出根系后，移栽到大田。

本实施例3共制作插穗55株，11个盒子，每个盒中5株，扦插后23天插穗开始生新叶，第35天有根出现，45天时候完成实验，共计生根35株，未生根10株，死亡10株，生根率64％。

本发明方法的4个步骤协同效果与常规的嫩枝扦插实验对比，改变了以往嫩枝扦插及硬枝扦插中存在的管理粗放、容易感染杂菌进而导致未生根先腐烂的情形，通过提供无菌环境，配合补光控温措施，大大降低了常规扦插中经常出现的腐烂情况，突破了红豆树嫩枝扦插关键技术瓶颈，提升了插穗的整体利用效率。