一种对保健品中西地那非进行快速检测的方法

摘要

一种对保健品中西地那非进行快速检测的方法，包括以下步骤：S1：样品前处理，取适量的保健品药丸，碾碎成固体粉末，放入离心管中，再加入1‑3mL的乙酸乙酯溶液，超声萃取2‑5min，得到保健品溶液；S2：将得到的保健品溶液离心至澄清，取1体积上清液，在取出的上清液中，加入0.5体积酸液进行反萃取，振荡混合后静置分层，取水相层待测；S3：在拉曼检测瓶中，加入纳米银溶胶、待测样品与团聚剂，混合均匀后进行拉曼光谱检测。本发明克服了现有技术的不足，利用金属银纳米颗粒在激光照射下的等离激元共振效应，从而增强保健品中低含量的非法添加物的拉曼信号，实现了保健品中非法添加物的快速，准确的检测。

说明书

技术领域

本发明涉及药物检测技术领域，具体涉及一种对保健品中西地那非进行快速检测的方法。

背景技术

西地那非，是一种治疗男性性功能勃起障碍的药物，最早是被用于治疗心血管疾病，其主要是通过选择性的抑制磷酸二酯(PDE5)，从而提高环单磷酸鸟苷(cGMP)的水平，引起海绵体平滑肌的松弛，血液流入，从而使得阴茎充血，勃起。西地那非在作为药物的同时，也具有很多的副作用，目前广泛已知的主要有头痛，消化不良，视力障碍，面色潮红，严重时甚至会导致猝死，属于国家严格监管的药物。

目前，有一些不法生产厂家通过在保健品中非法添加西地那非，从而达到抗疲劳，增加抵抗力的效果，这对消费者而言是十分危险的。因此发展出一种可以对保健品中非法添加的西地那非等药物进行准确检测的方法是十分必要的。目前常用的检测方法主要有高效液相色谱串联质谱，其具有较为优异的检出限，但是其检测所需的过程较为复杂，耗时长，检测成本较高，难于进行普适性的推广与应用。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种对保健品中西地那非进行快速检测的方法，克服了现有技术的不足，满足对保健品中西地那非检测需求，该方法具有方便、快捷、高灵敏、成本低的特点。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种对保健品中西地那非进行快速检测的方法，包括以下步骤：

步骤S1：样品前处理，取适量的保健品药丸，碾碎成固体粉末，放入离心管中，再加入1-3mL的乙酸乙酯溶液，超声萃取2-5min，得到保健品溶液；

步骤S2：将得到的保健品溶液离心至澄清，取1体积上清液，在取出的上清液中，加入0.5体积酸液进行反萃取，振荡混合后静置分层，取水相层待测；

步骤S3：在拉曼检测瓶中，加入纳米银溶胶、待测样品与团聚剂，混合均匀后进行拉曼光谱检测。

优选地，所述步骤S2中的酸液包括盐酸，硫酸，乙酸，硝酸及其任意比例的混合溶液。

优选地，所述步骤S3中的纳米银溶胶的粒径为40-60nm。

优选地，所述步骤S3中的纳米银溶胶的制备方法包括如下步骤：

步骤S31：称量30mg的硝酸银，溶解于150mL的去离子水中；

步骤S32：煮沸后加入2-3mL的1%二水柠檬酸钠,高速搅拌1-2h,冷却至室温；

步骤S32：通过筛选得到纳米银溶胶。

优选地，所述步骤S3中团聚剂为无机盐溶液，钠盐，镁盐，钙盐，钾盐溶液或者混合盐溶液中的一种。

优选地，所述步骤S3中的纳米银溶胶采用未经处理的纳米银溶胶或浓缩的纳米银溶胶。

优选地，所述步骤S3中纳米银溶胶、待测样品与团聚剂的加入比例为5：1-5：0-2。

本发明提供了一种对保健品中西地那非进行快速检测的方法。具备以下有益效果：本发明通过提取，离心，反萃取步骤，可以在5-6min内完成前处理过程，最终运用表面等离激元拉曼光谱技术在1min内完成对待测样的检测，得出带有分子指纹信息的拉曼光谱谱图；可以将待测样得到的表面等离激元增强拉曼光谱谱图与样品标准的表面等离激元增强比对，从而判断待测样品中是否含有所需要检测的分子，整个数据分析过程是自动化的过程，无人为的干预。

附图说明

为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案，下面将对现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为西地那非纯样标准品的拉曼光谱特征信号图；

图2为实例中纳米银溶胶对四种保健品检测得到的表面增强拉曼光谱图；

图3为实例中浓缩纳米银溶胶对四种保健品检测得到的表面增强拉曼光谱图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明中的附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。

本发明公开了一种对保健品中西地那非进行快速检测的方法，包括以下步骤：

步骤S1：样品前处理，取适量的保健品药丸，碾碎成固体粉末，放入离心管中，再加入2mL的乙酸乙酯溶液，超声萃取4min，得到保健品溶液；

在本步骤中，加入的乙酸乙酯是为了实现对保健品中西地那非的提取，而将保健品药丸碾碎成固体粉末是为了使得保健品与有机溶剂乙酸乙酯进行最大面积的接触，从而提高萃取的效率，且加入的乙酸乙酯为2mL，主要是按照体积比，能够没过保健品颗粒，且加入的量不会使得提取得到的西地那非的浓度过低而影响到后续检测的灵敏度。

步骤S2：将得到的保健品溶液离心至澄清，取1mL上清液，在取出的上清液中，加入0.5mL酸液进行反萃取，振荡混合后静置分层，取水相层待测；

在本步骤中的酸液包括盐酸，硫酸，乙酸，硝酸及其任意比例的混合溶液。

在本步骤中，取超声提取得到的保健品溶液1mL进行离心得到澄清液，从而去除溶液中的一些杂质。后面又对离心得到的澄清液进行反萃取，在试管中加入酸液，酸液的效果主要是利用西地那非在酸液中的溶解量要优于有机溶剂中，从而得到西地那非的水溶液。酸液与澄清液的体积比为1：2，其中酸液的浓度为45mg/kg是最佳的，太高的浓度会使得后续金属的纳米颗粒发生聚集，从而使得检测失效，太低会导致反萃取的效果不佳，使得检测灵敏度降低。

步骤S3：在拉曼检测瓶中，加入纳米银溶胶、待测样品与团聚剂，混合均匀后进行拉曼光谱检测。

具体地，步骤S3中所用到的纳米银溶胶的粒径为40-60nm。

其中纳米银溶胶的筛选合成包括如下步骤：

步骤S31：称量30mg的硝酸银，溶解于150mL的去离子水中；

步骤S32：煮沸后加入2-3mL的1%二水柠檬酸钠,高速搅拌1-2h,冷却至室温；

步骤S32：通过筛选得到纳米银溶胶。

依据上述方法的在几组实验中，都称量30mg的硝酸银，溶解于150mL的去离子水中，煮沸后分别加入2mL和3mL的1%二水柠檬酸钠,高速搅拌1h和1.5h,冷却至室温，经过筛选，发现在2mL的1%二水柠檬酸钠，高速搅拌1h的反应条件下得到的纳米溶胶的拉曼增强效果是最佳的。

进一步地，所述步骤S3中团聚剂为无机盐溶液，钠盐，镁盐，钙盐，钾盐溶液或者混合盐溶液中的一种。

进一步地，所用于拉曼检测的银溶胶主要有两种，一种是反应得到的未加处理的银溶胶，一种是经过浓缩后的银溶胶。浓缩的银溶胶主要是通过将未加处理的银溶胶加入到离心管中，进行离心，离心管中分为上清液和底部的银纳米颗粒沉淀，取出上清液后继续加入银溶胶，进行振荡后使得底部沉淀分散于新加入的银溶胶中，然后再进行离心，如此步骤重复2-3次，得到浓缩的银溶胶。相同体积的银溶胶中，浓缩银溶胶中的纳米颗粒的数量相对于未加处理的银溶胶要多，即纳米颗粒的间距更小，增强效果要更好一些，能够对一些更低浓度地待测液进行检测。

进一步地，所述步骤S3中纳米银溶胶、待测样品与团聚剂的加入比例为5：1-5：0-2。团聚剂主要是使得银纳米颗粒之间的间距减小，增强拉曼的检测效果，当保健品中的违禁品含量较高，即纳米银溶胶的检测效果就较好的情况下，是不需要加入团聚剂的，而当检测效果不佳时，加入团聚剂，且增加团聚剂的加入量，能够使得检出限有所降低。

实施例一

对不同保健品中的西地那非的检测，具体步骤如下：

样品前处理：取大约半颗的不同的保健品药丸，用碾磨进行碾碎，将其加入到5mL的离心管中，加入2mL乙酸乙酯进行超声提取4min；将超声提取后的溶液进行离心2min，收集上层清液1mL，后加入盐酸溶液0.5mL，振荡30s,静置分层为水相和有机相，下层为待测液，水相。

检测：分别取1mL未加处理和浓缩的纳米银溶胶于拉曼检测瓶中，取200uL待测液置于检测瓶中，后加入200uL团聚剂NaCl溶液，混合均匀后在手持式拉曼光谱仪上进行检测，未加处理的银溶胶和浓缩银溶胶的检测结果如附图2-3所示。

本发明利用有机溶剂乙酸乙酯萃取保健品中的西地那非，离心除杂，再用酸液来进行反萃取得到西地那非水溶液；结合表面增强拉曼光谱技术，运用银纳米粒子对西地那非的信号实现增强，消除了基底的干扰，得到了西地那非的拉曼光谱信号，8min以内能够实现对不同保健品中的西地那非得快速检测，且检测成本较低，便于操作，能够满足实际检测的需要。图1为西地那非的拉曼光谱特征信号图，横坐标为拉曼位移，纵坐标为拉曼信号强度，特征峰位为650, 814, 1234, 1527, 1579等。图2、图3为本发明实施例中两种不同银溶胶对不同保健品中西地那非检测得到的表面增强拉曼光谱图。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。