一种热带雨林土壤微生物宏基因组Fosmid文库构建方法

摘要

本发明属于微生物领域，公开了一种热带雨林土壤微生物宏基因组Fosmid文库构建方法，采用PVPP洗涤，去除杂质后，溶菌酶—蛋白酶K—SDS—CTAB裂解法，提取和纯化大片段的土壤微生物基因组DNA；经琼脂糖凝胶低电压电泳和脉冲电泳检测；末端修复宏基因组DNA，将marker和小样切下，使用连接酶将回收产物连接到Fosmid载体pCC1FOS上；连接反应在2h内完成；连接产物经λ包装提取物包装，EPI300‑T1R菌株转染，涂于含12.5μg/mL的氯霉素的LB平板上，37℃，过夜培养。本发明反映在热带雨林这一极端的环境中，微生物及其基因资源极端而丰富，有利于微生物功能基因挖掘与利用。