海绵Fosmid宏基因组文库构建及抗菌功能基因初步筛选

摘要

本文从原料处理以及DNA抽提两方面着手，采用不同方法对海绵宏基因组DNA进行了抽提。比较各方法所提取的DNA浓度、纯度、片段大小，结果表明：原材料采用撕并悬浮，抽提过程采用十二烷基磺酸钠（SDS）/十二烷基肌氨酸钠/蛋白酶K（PK）所抽提得到的DNA质量较高，并且具有一定的稳定性，比较适用海绵宏基因组抽提及相关Fosmid文库的构建。而且，在此基础上通过正交试验对提取条件进行了进一步的优化。 之后，利用提取的DNA构建了一个海绵宏基因组Fosmid文库，共得到约18000个克隆，插入片段在26kb到50kb之间，其中大部分的插入片段在31kb到40kb之间。 最后，通过PCR扩增，结合传统的抑菌试验，筛选得到23株具有一定抑菌活性的克隆，并在此基础上构建亚克隆文库，最终，找到了包含有编码抑菌活性物质的基因。对其进行测序比对分析发现，该段基因能够编码一个类似对虾科抗菌肽的蛋白，可能与其抗菌活性有关。