三种苯酚类衍生物的制备方法及其在制备抗HIV药物中的应用

摘要

本发明公开了三种苯酚类衍生物的制备方法及其在制备抗HIV药物中的应用。本发明中的三种化合物是由一株毛壳菌进行发酵后制备而得，其化学结构如通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示，具有较强的抗HIV活性，可用于制备和开发HIV治疗药物。本发明为研发HIV治疗药物提供新的化合物来源，对我国海洋药物开发具有重要的意义，促进深海生物资源的有效应用。

说明书

技术领域

本发明涉及有机化合物技术领域，具体是三种苯酚类衍生物的制备方法及其在制备抗HIV药物中的应用。

背景技术

HIV病毒在世界各国及地区已经蔓延成世界上最重大的公共卫生挑战之一，为当今世界的一大医学难题。据联合国艾滋病规划署(UNAIDS)的最新统计，2014年全世界存活HIV携带者及AIDS患者共3690万，新感染200万，死亡120万人。截至2015年10月底，我国报告存活的HIV病毒感染者和AIDS病人共计57.5万例，死亡17.7万人，AIDS已成为当前我国最严重的感染性疾病。天然化合物作为创新药物研究的重要源泉，据最新的一份统计表明，从1981年到2014年共三十多年的时间里一共批准的小分子药物有1211个，其中来自天然产物及其衍生物的占65％(J.Nat.Prod.,2016,79,629–661)。上世纪五十年代，由于青霉素的发现，导致了对陆地微生物持续50多年的集中研究和开发，时至今日，陆地微生物次级代谢产物发现的重复率已高达95％，因此人们将关注度转向海洋，尤其是深海。于是，海洋微生物来源的代谢产物迅速成为药物研发的新源泉。目前已有多种海洋来源的微生物次级代谢产物被开发成用于治疗包括肿瘤、病毒等在内多种疾病的药物。

因此，在海洋微生物中筛选发现具有HIV活性的天然产物对于治疗HIV药物研发具有重要意。

发明内容

本发明的目的在于提供三种苯酚类衍生物的制备方法及其在制备抗HIV药物中的应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种通式(Ⅰ)所示的化合物，或其盐；

一种通式(Ⅱ)所示的化合物，或其盐；

一种通式(Ⅲ)所示的化合物，或其盐；

通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其盐的制备方法，是对毛壳菌进行固体发酵和发酵提取物提取纯化得到。

通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其盐的用途，用于制备HIV活性药物。

作为本发明再进一步的方案：所述HIV活性药物为HIV抑制或激活的药物。

一种抗HIV活性药物，是将通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其盐作为有效剂量的活性成分的药物。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明中的三种化合物是由一株深海真菌进行发酵后制备而得，具有较强的抗HIV活性，可用于制备和开发HIV治疗药物，本发明为研发HIV治疗药物提供新的化合物来源，对我国海洋药物开发具有重要的意义，促进深海生物资源的有效应用。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。

一种通式(Ⅰ)所示的化合物，或其盐；

一种通式(Ⅱ)所示的化合物，或其盐；

一种通式(Ⅲ)所示的化合物，或其盐；

通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其盐的制备方法，是对毛壳菌进行固体发酵和发酵提取物提取纯化得到。通过对深海真菌里的毛壳菌进行固体发酵和发酵提取物提取纯化，从中得到三种化合物，经现代波谱学结构分析确定结构，具体结构如通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示。对通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物进行活性检测，发现三种化合物对HIV有良好的活性，可以作为HIV药物开发的先导化合物，为开发新的HIV治疗药物提供了备选化合物，对开发中国海洋药物资源具有重要的意义。

通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其盐的用途，是将通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其盐用于制备HIV活性药物；所述HIV活性药物为HIV抑制或激活的药物。

一种毛壳菌属sp.XT-20-19(Chaetomium globosum)，已于2016年12月20日保藏于国家海洋局第三海洋研究所的中国海洋微生物菌种保藏管理中心MCCC，地址是厦门市思明区大学路178号，邮编：361005，保藏编号为CGMCC No.8652。

实施例1

通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物的制备：

本实施例以深海真菌中的毛壳菌为原料，制备毛壳菌化合物，具体步骤如下：

(1)取毛壳菌，加入到培养基中，静置1个月，加有机溶剂萃取，得到萃取液，将萃取液低压浓缩，得到20g毛壳菌发酵粗提物；

(2)将步骤(1)中毛壳菌发酵粗提物进行100-200目硅胶柱层析吸附，采用氯仿-甲醇溶液进行洗脱；

(3)根据TLC检测结果，合并步骤(2)中的氯仿-甲醇溶液，减压浓缩蒸干后得到3个活性部位，分别为50mg、40mg、10mg；

(4)将步骤(3)中所得活性部位分别用葡聚糖凝胶-20吸附，然后用氯仿-甲醇溶液洗脱；

(5)根据TLC检测结果，收集和合并步骤(4)中氯仿-甲醇溶液洗脱液，减压浓缩蒸干后得到三种化合物分别为A、B、C，重量分别为40mg、30mg、5mg，均为白色固体。

将上述所得白色固体分别用¹H-NMR和¹³C-NMR谱分析，结果化合物A有δ8.15、8.15、8.30等三个峰，积分均为1H指示存在于苯环上的3个-OH。积分为4H的δ4.88为单峰，显示相应所在碳为连有-OH的叔碳，积分为3H的δ1.92为单峰；δ144.4、138.1、133.1、128.9、116.1、108.8等6个季碳表明化合物A中存在苯环，并且苯环上H全部被取代，其中δ144.4、138.1、133.1等3个C上连有-OH；而δ73.0、72.3等2个C表明的碳与-OH相连。综合以上结果(如表1所示)，确定化合物A为7-methyl-1,3-dihydroisobenzofuran-4,5,6-triol，结构如通式(Ⅰ)所示，HPLC检测结果表明其纯度为95.3％。

化合物B有δ9.18、5.08、1.96等三个峰，其中δ9.18积分为3H指示为存在于苯环上的3个-OH。δ5.08积分为2H的为单峰，显示相应所在碳可能为连有-OH的仲碳，积分为3H的δ1.96为单峰；δ151.3、143.2、138.2、133.0、109.2、102.8等6个季碳表明化合物B中存在苯环，并且苯环上H全部被取代；δ170.0表明该化合物B中可能存在内脂。综合以上结果(如表1所示)，确定化合物B为5,6,7-trihydroxy-4-methylisobenzofuran-1(3H)-one，结构如通式(Ⅱ)所示，HPLC检测结果表明其纯度为97.2％。

化合物C有δ6.96、6.65等3个峰，δ6.96积分为2H，表明为苯环上的3个H；δ4.67、4.57、3.89积分均为1H，其中δ3.89为双峰，表明所在碳可能为连有-OH的叔碳；δ3.77积分为3H，表明所在碳可能为连有羟甲基所在的碳；δ157.9、141.3、128.0、125.0,119.9、109.4等6个季碳表明化合物C中存在苯环，并且苯环上3H被取代；δ157.9表明化合物C中可能连有羟基。综合以上结果(如表2所示)，确定化合物C为8-methoxy-1,2,3,4-tetrahydronaphthalene-1,2,4-triol，结构如通式(Ⅲ)所示，HPLC检测结果表明其纯度为93.7％。

表1：本发明化合物A、B的¹H、¹³C-NMR数据

表2：本发明化合物C的¹H、¹³C-NMR数据

No.¹³Cδ¹Hδ[mult,J(Hz)]167.0d4.67(d,4.0)270.1d3.89(tt,8.0,4.0)335.2t2.18(qq,8.0,4.0),1.74(sq,8.0)465.7d4.57(t,4.0)4a141.3s5119.9d6.96(d,8.0)6129.4d6.96(d,8.0)7115.1d6.95(d,8.0)8157.9s8a125.0s955.4q3.77s1-OH4.72(d,4.0)2-OH5.00(d,4.0)3-OH4.98(d,7.4)

实施例2：实施例1制备得到的化合物A、B、C的体外抗HIV活性筛选

本实施例选择J-Lat A2细胞作为活性测试细胞，从而检测实施例1中化合物A、B、C对HIV的活性。

本实施例分为以下4组：

(1)空白对照组；

(2)化合物A实验组：实施例1中步骤(5)所得深海真菌化合物A；

(3)化合物B实验组：实施例1中步骤(5)所得深海真菌化合物B；

(4)化合物C实验组：实施例1中步骤(5)所得深海真菌化合物C；

本实施例采用如下操作：

在24孔板的每孔中加入1mL浓度为1×105个/mL的J-Lat A2细胞悬液，置37℃，5％CO₂培养箱内培养24h，而后分别加入样品(10μL/孔，终浓度10μg/mL)，prostratin作为阳性对照、10μL>

结果显示化合物A、B、C对HIV有较明显的活性，可用于制备相应的治疗药物。

结果显示三种苯酚类衍生物对HIV有较明显的活性，其中浓度为20ug/mL时抑制率分别为75％、88％和70％，可用于制备相应的治疗药物。

本发明中的三种化合物是由一株深海真菌进行发酵后制备而得，具有较强的抗HIV活性，可用于制备和开发HIV治疗药物，本发明为研发HIV治疗药物提供新的化合物来源，对我国海洋药物开发具有重要的意义，促进深海生物资源的有效应用。

上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下作出各种变化。