一种测试速释剂型药物阿莫西林克拉维酸钾分散片的溶出曲线的方法

摘要

本发明属于分析化学领域，具体涉及测试阿莫西林克拉维酸钾分散片的溶出曲线的方法。(1)通过系统适用性、溶液稳定性、线性、滤膜影响因素等试验，确定高效液相检测溶出度的试验方法；(2)通过溶出介质、搅拌桨转速和取样时间点的选择等试验，确定溶出曲线的检测方法；(3)采用溶出曲线测定方法；采用比较溶出曲线相似性f

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及测试阿莫西林克拉维酸钾分散片的溶出曲线的方法。

背景技术

阿莫西林克拉维酸钾分散片由阿莫西林三水合物和克拉维酸钾组成的分散片。本品可直接用水吞服，也可放入适量水中搅拌至混悬状态后服用，但是患者绝大部分情况下都是直接用水来吞服。阿莫西林为广谱青霉素类抗生素，克拉维酸钾本身只有微弱的抗菌活性，但具有强大的广谱β-内酰胺酶抑制作用，两者合用，可保护阿莫西林免遭β-内酰胺酶水解。适用于敏感菌引起的上呼吸道感染、下呼吸道感染、泌尿系统感染、皮肤及软组织感染及其他感染。目前，英国药典和中国药典均收载阿莫西林克拉维酸钾分散片，英国药典该品种没有溶出度检测项，中国药典仅有在水作为溶出介质的溶出度检测，且分散片溶出度测试中搅拌桨的转速与普通片剂和干混悬剂均为75转，取样时间分散片为15分钟，其他剂型为30分钟。这些溶出检测条件，无法反映出阿莫西林克拉维酸钾分散片的体外释放行为，且对于处方或工艺的变量对体外释放的影响无法有效地区分。因此，亟待建立一个具有区分力的溶出测试方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测试速释剂型药物阿莫西林克拉维酸钾分散片溶出曲线的方法。通过系统适用性、溶液稳定性、线性、滤膜影响因素等试验，确定高效液相色谱法检测溶出度的试验方法；通过溶出介质、搅拌桨转速和取样时间点的选择等试验，确定溶出曲线的检测方法；采用比较溶出曲线相似性f₂因子进行参比样品(样品1)与2、3、4、5样品溶出曲线的比较，可以很好的区分速释剂型药物阿莫西林克拉维酸钾分散片处方或工艺的变量对体外释放的影响，进而保证药品质量，达到质量与疗效的一致性。

本发明的目的是这样实现的：一种测试速释剂型药物阿莫西林克拉维酸钾分散片的溶出曲线的方法，该检测方法包括如下步骤：

(1)溶出方法：测定前，对仪器装置进行必要的调试，使桨叶底部距溶出杯的内底部25mm±2mm；分别量取经脱气处理的溶出介质900ml置各溶出杯内，加温，待溶出介质温度恒定37℃±0.5℃，取本品6片，称重，分别投入6个溶出杯内，启动仪器，转速为50～75转/分钟，立即计时；经1,5,10,15分钟后，距浆叶顶端和液面的中点和距溶出杯内壁不小于10mm处,取溶出液10ml，并即时补充相同温度相同体积的溶出介质，立即用0.45μm微孔滤膜，滤过，弃去初滤液5ml；取续滤液为供试品溶液；

(2)溶出介质：介质A，纯化水；介质B，pH1.2溶液；介质C，pH4.0醋酸/醋酸钠缓冲液；介质D，pH6.8磷酸盐缓冲液；

介质配制，介质B，取氯化钠2.0g，加水适量使溶解，加盐酸7ml，再加水稀释至1000ml，混匀；介质C，将0.05mol/L醋酸溶液-0.05mol/L醋酸钠溶液按体积比16.4:3.6混合，即得；介质D，取磷酸二氢钾1.7g和无水磷酸氢二钠1.775g，加水适量使溶解后，定容至1000ml；

(3)检测方法：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂

检测波长：220nm

流速：每分钟1.0ml

进样体积：20μl

柱温：30～35℃

试剂及试液：溶液A，取6.9ml 85％磷酸置100量瓶中，加水稀释至刻度；溶液B，取氢氧化钠4.3g，加水溶解成100ml即得；溶液C，取磷酸二氢钠7.8g，加水900ml使溶解，用溶液A或溶液B调节pH值至4.4±0.1，加水稀释至1000ml；流动相，溶液C与甲醇体积比为95:5；溶液制备：系统适用性试验对照品溶液的制备，精密称取阿莫西林克拉维酸系统适用性试验对照品，加流动相溶液适量，超声溶解制成每1ml约含0.8mg的溶液，摇匀；对照品溶液的制备，按下述方法分别配制二份，精密称取克拉维酸对照品约8mg与阿莫西林对照品约33mg置250ml量瓶中，加溶出介质溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；

测定方法：精密量取系统适用性试验对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，阿莫西林、克拉维酸及其他色谱峰之间的分离度应大于1.5；精密量取第一份对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，连续5针，记录色谱图，计算RSD，RSD应不大于2.0％，再精密量取第二份对照溶液20μl，注入液相色谱仪，连续2针，记录色谱图，计算回收率，应在99.0～101.0％；再精密量取供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，分别计算出每片中阿莫西林和克拉维酸的溶出量；

(4)计算公式

式中：A_供：供试品溶液峰面积

A_对：对照品溶液峰面积

W_对：对照品称样量，mg

P：对照品含量，％

S：计算阿莫西林溶出度时为125，mg；计算克拉维酸溶出度时为为31.25，mg

式中：A_n，各时间点测得溶出度；V₁，各时间点固定取样体积，ml；V₂，溶出介质体积，ml；在步骤(1)中，所述转速为65转/分钟；在步骤(3)中，所述色谱柱为菲罗门公司的Gemini>18，直径4.6mm，长度250mm；所述柱温为33℃。

本发明的优点在于：建立了一个具有区分力的溶出测试方法，可以很好的区分速释剂型药物阿莫西林克拉维酸钾分散片处方或工艺的变量对体外释放的影响，进而保证药品质量，达到质量与疗效的一致性。

附图说明

附图1阿莫西林在介质A中的溶出曲线

附图2阿莫西林在介质B中的溶出曲线

附图3阿莫西林在介质C中的溶出曲线

附图4阿莫西林在介质D中的溶出曲线

附图5克拉维酸在介质A中的溶出曲线

附图6克拉维酸在介质C中的溶出曲线

附图7克拉维酸在介质D中的溶出曲线

具体实施方式

通过下述实例将有助于理解本发明，但不能局限本发明的内容。

说明：附图1-7中，附图标记1为阿莫西林克拉维酸钾分散片参比样品，附图标记2、3、4、5分别为不同处方或工艺制成的阿莫西林克拉维酸钾分散片自制样品。

实施例1：

a)溶出条件

溶出试验仪：RCZ-8M，取样收集系统RZD-8D

溶出介质：介质A，纯化水；介质B，pH1.2溶液；介质C，pH4.0醋酸/醋酸钠缓冲液；介质D，pH6.8磷酸盐缓冲液。各900ml。

介质配制，介质B，取氯化钠2.0g，加水适量使溶解，加盐酸7ml，再加水稀释至1000ml，混匀；介质C，将0.05mol/L醋酸溶液-0.05mol/L醋酸钠溶液按体积比16.4:3.6混合，即得；介质D，取磷酸二氢钾1.7g和无水磷酸氢二钠1.775g，加水适量使溶解后，定容至1000mll。转速：桨法65转/分钟

取样时间点：1分钟，5分钟，10分钟，15分钟

供试品溶液：距浆叶顶端和液面的中点和距溶出杯内壁不小于10mm处，取溶出液10ml，并即时补充相同温度相同体积的溶出介质，立即用0.45μm微孔滤膜，滤过，弃去初滤液5ml。取续滤液为供试品溶液

b)高效液相色谱检测条件

高效液相色谱仪：Agilent 1260

色谱柱：菲罗门公司Gemini>18>

试剂及试液：溶液A，取6.9ml 85％磷酸置100量瓶中，加水稀释至刻度；溶液B，取氢氧化钠4.3g，加水溶解成100ml即得；溶液C，取磷酸二氢钠7.8g，加水900ml使溶解，用溶液A或溶液B调节pH值至4.4±0.1，加水稀释至1000ml。流动相，溶液C与甲醇体积比为95:5。检测波长：220nm；流速：1.0ml/min；进样体积：20μl；柱温：33℃

c)对照品溶液

系统适用性试验对照品溶液的制备：精密称取阿莫西林克拉维酸系统适用性试验对照品8mg,置于10ml容量瓶中，加流动相溶液适量超声溶解并稀释至刻度，摇匀。

对照品溶液的制备：精密称取克拉维酸对照品约8mg与阿莫西林对照品约33mg置250ml量瓶中，加溶出介质溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液

d)测定方法：精密量取系统适用性试验对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，阿莫西林、克拉维酸及其他色谱峰之间的分离度应大于1.5。精密量取第一份对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，连续5针，记录色谱图，计算RSD，RSD应不大于2.0％。，再精密量取第二份对照溶液20μl，注入液相色谱仪，连续2针，记录色谱图，计算回收率，应在99.0～101.0％。再精密量取供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，分别计算出每片中阿莫西林和克拉维酸的溶出量。

e)计算公式

式中：A_供：供试品溶液峰面积

A_对：对照品溶液峰面积

W_对：对照品称样量，mg

P：对照品含量，％

S：计算阿莫西林溶出度为125，mg；计算克拉维酸溶出度为31.25，mg

式中：A_n，各时间点测得溶出度；V₁，各时间点固定取样体积，ml；V₂，溶出介质体积，ml溶出曲线测定方法：溶出介质为介质A、介质B、介质C、介质D各900ml；转速，桨法65转/分钟；取样时间点，1分钟，5分钟，10分钟，15分钟，30分钟检测1，2，3，4，5五个样品。其中，在介质B，即pH1.2溶液中，克拉维酸钾十分不稳定，故不做检测。

表1.样品1的65转溶出度

表2.样品2的65转溶出度

表3.样品3的65转溶出度

表4.样品4的65转溶出度

表5.样品5的65转溶出度

采用法进行溶出曲线的比较。比较1分钟，5分钟，10分钟，15分钟共4个时间点。若f₂因子值高于50，可认为两条曲线具有相似性。

计算公式：

试验样品各时间点的溶出；T_t，参比样品各时间点的溶出

表6.样品2，3，4，5与样品1(参比样品)阿莫西林f₂因子比较

表7.样品2，3，4，5与样品1(参比样品)克拉维酸f₂因子比较

据表6和表7的数据显示，样品2与样品1(参比样品)f₂因子均大于50，溶出曲线有相似性；样品3、4、5与样品1(参比样品)f₂因子均小于50，溶出曲线没有相似性。由此，按权利1所述溶出方法，采用f₂因子法进行溶出曲线的比较，可以很好地区分1(参比样品)与2、3、4、5样品的体外释放。

实施例2：

1)系统适用性试验

取系统适用性试验对照品溶液20μl注入液相色谱仪，连续进样2次。柱效以阿莫西林峰计为13017；阿莫西林峰与克拉维酸峰的分离度为13.34。

第一份对照品溶液20μl连续进样5次，第二份对照品溶液20μl连续进样2次。

第一份对照品溶液阿莫西林峰和克拉维酸峰峰面积的RSD％均为0.1％；第二份对照品溶液与第一份对照品溶液回收率为99.7％。

(2)溶液稳定性

分别用介质A、介质B、介质C与介质D依法配制供试品溶液，分别于8℃、常温、37℃条件下放置。从0时开始，每隔一定时间，注入色谱仪中，分别记录色谱峰面积A_样1，A_样2，A_样3，……A_样n，计算A_样n/A₀，测试溶液与0时溶液(控制溶液)的峰面积比值应在0.980～1.020之间，如在第n时间点发现不符合规定的，则停止测试，取前一时间点即为溶液在规定条件下的稳定时间。

表8.溶液稳定性

(3)线性

精密称取阿莫西林对照品适量，用水溶解并稀释制成浓度为0.4mg/mL的溶液做为贮备液，将上述贮备液用水稀释制成浓度范围为8.0～160.0μg/mL的一系列溶液，照以上色谱条件分别取20μL进样分析，记录色谱图。以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标绘制标准曲线。回归方程(n＝7)为，A＝45359C+150.61(r＝0.9995)，结果表明阿莫西林在8.0～160.0μg/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系；精密称取克拉维酸对照品适量，用水溶解并稀释制成浓度为0.12mg/mL的溶液做为贮备液，将上述贮备液用水稀释制成浓度范围为3.0～50.0μg/mL的一系列溶液，照以上色谱条件分别取20μL进样分析，记录色谱图。以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标绘制标准曲线。回归方程(n＝7)为，A＝43951C+23.73(r＝0.9993)，结果表明克拉维酸在3.0～50.0μg/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系

(4)滤膜影响因素

取控制溶液(将样品溶液离心取上清液)，注入色谱仪，记录峰面积为A_控；取测试溶液(将样品溶液用上述滤膜滤过，分别弃去3.0mL，5.0mL，7.0mL)，注入色谱仪，记录峰面积为A_样1，A_样2，A_样3，计算A_样n/A_控。测试溶液与控制溶液的峰面积比值应在0.980～1.020之间，经试验得，初滤液弃去5.0mL。

表9.测试溶液与控制溶液的峰面积比值

实施例3：

(1)溶出介质的选择

a)阿莫西林，解离常数(25℃)，pKa₁＝2.6(针对羧基，采用滴定法测定)；pKa₂＝7.3(针对氨基，采用滴定法测定)；pKa₃＝9.7(针对苯酚的醇羟基，采用滴定法测定)。在各溶出介质中的溶解度(37℃)，pH1.2：26.6mg/ml；pH4.0：3.3mg/ml；pH>

确定采用pH1.2溶液、pH4.0缓冲液、pH6.8缓冲液和水四种溶液，各900ml作为溶出介质。b)克拉维酸钾，解离常数(25℃)：pKa＝2.36；在各溶出介质中的溶解度(37℃)，pH4.0：2.5g/ml；pH 6.8：2.5g/ml；水：2.5g/ml。克拉维酸钾在pH1.2溶液中，在1min取样时即降解了80％，确定采用pH4.0缓冲液、pH6.8缓冲液和水三种溶液，各900ml作为溶出介质。

(2)搅拌桨转速的选择

表10.样品1的阿莫西林在介质A中不同转速溶出度

表11.样品1,2,3,4,5的阿莫西林在介质A中75转溶出度

采用50转/min，阿莫西林在10min达到平台(79.59％)，溶出至30min(82.01％)仅比10min多2.42％，均未达到90％的溶出量，且样品在溶出杯底部有沉积；60转/min，阿莫西林在15min达到平台(83.00％)，溶出至30min(86.23％)仅比15min多3.23％，均未达到90％的溶出量；65转/min、75转/min，阿莫西林均在10min达到平台，连续两点溶出度差值均小于5％，且大于90％的溶出量，75转/min检测溶出度2、3、4、5四个样品与样品1(参比样品)无法区分。考虑到分散片的剂型特点，于是选择65转/min作为研究溶出曲线的转速。

(3)取样时间点的选择

考虑到分散片检测分散均匀性时，在3min内均需分散完全，通过710μm孔径筛网。且自动溶出仪取样收集系统RZD-8D最小取样时间间隔为4min。阿莫西林与克拉维酸在10min，溶出量均达到平台。所以选择1min，5min，10min，15min的取样时间点。