栝楼仁二醇降低组蛋白甲基转移酶1表达水平的新功能

摘要

栝楼仁二醇是来自于中药材瓜蒌子的重要活性成分。本申请介绍栝楼仁二醇的一种新功能，通过其对大鼠原代培养神经元的作用实验，我们发现栝楼仁二醇的加入能够降低

说明书

技术领域

本申请属于药材活性成分新功能的技术领域，尤其涉及于一种分离于中药材瓜蒌子的活性成分可降低海马神经元EZH1基因表达水平的新功能。

背景技术

组蛋白甲基转移酶1，即EZH1，是一种催化组蛋白H3甲基化的关键酶。组蛋白甲基化是表观遗传学调控的重要层次，由EZH1催化产生的组蛋白H3第27位赖氨酸的甲基化是机体进行基因表达调控的重要手段，同时也是组蛋白密码的重要组成部分。在不同的生理病理背景下，EZH1表达量的改变指示着目标基因的整体改变，体现出机体整体上的适应性或损伤性变化。

瓜萎子为葫芦科植物栝楼Trichosanrhes kirilowii Maxim.或双边栝楼Thrchosanrhes rosthornii Harms的干燥成熟种子。前者主产山东长清、肥城等地, 河北、山西、陕西、江苏等地均产。后者分布于四川、贵州、云南、广西、广东等地。瓜蒌子是一种重要的中药药材，具有润肺化痰、滑肠通便之功效，常用于燥咳痰勃，肠燥便秘。瓜蒌子主要含有油脂、甾醇、三萜等成分，其中栝楼仁二醇是最早得到分离鉴定的一种三萜化合物。研究表明，瓜蒌子在抗心脑血管疾病、抗炎症、抗肿瘤及延缓衰老等方面都存在有益效果。但瓜蒌子活性成分，尤其是栝楼仁二醇对中枢神经系统的功能作用目前尚未见报道。

发明内容

瓜蒌子为常用中药材，其购自安徽省中医院药房。栝楼仁二醇标准品购自上海生工有限公司。

瓜蒌子活性成分的分离过程为：

取瓜蒌子样品20g，置于150ml平底烧瓶中, 加入5%氢氧化钾甲醇溶液100ml, 称定重量, 置75℃恒温水浴中加热回流3h, 冷却至室温后加5%氢氧化钾甲醇溶液补足至反应前的重量,摇匀,滤过。精密吸取续滤液50ml, 减压回收至干。以蒸馏水100ml溶解转移至分液漏斗中, 以水饱和的乙酸乙酯提取4次(40 ml x l, 30 ml x 3), 合并乙酸乙酯液。乙酸乙酯层以蒸馏水洗涤, 洗至下层水液pH为中性, 用适量无水硫酸钠干燥过夜。滤过, 滤液减压回收至干,用甲醇溶解转移至10ml容量瓶中定容。所获得的液体成分利用HPLC进行分析，并与栝楼仁二醇标准品的流出峰进行比较。HPLC的条件为：样品吸取2 ml进样，甲醇：1mol/L氨水（85:15）洗脱，每2min收集一份，收集20份后，改用甲醇：1mol/L (90:10)洗脱，每2 min收集一份。经比较，瓜蒌子活性成分含有栝楼仁二醇。所购得栝楼仁二醇的分子式为：。因此，我们以栝楼仁二醇标准品作为研究对象来进行后续的神经系统功能试验。

栝楼仁二醇的生理活性检测：

将出生24h内的SD大鼠处死并取海马组织原代培养。将海马组织放在200目筛网上，用眼科剪剪小块过筛，经过1000rpm离心8min后倒掉上清液，加高糖DMEM培养基并加入10%胎牛血清，巴氏管吹打后种6孔板。培养条件为37^oC>EZH1的表达量进行定量分析。所使用的PCR条件为：95^oC预变性>oC>oC>oC>EZH1表达量与内参基因GAPDH的相对比值。

实验组和对照组所获得的mRNA相对定量结果如图1所示。

从图1中可以看出，经过栝楼仁二醇的处理，EZH1基因的表达量有所下降，其表达量为对照组的0.74倍。

本申请证明了瓜蒌子活性成分栝楼仁二醇对大鼠中枢神经系统表观遗传学机制的调控作用，该结果意味着栝楼仁二醇可以对神经系统施加全局性的影响，有利于进一步探讨该活性物质对机体情绪、学习记忆、运动控制等方面能力的影响。

附图说明

图1 栝楼仁二醇的添加导致大鼠海马区EZH1 mRNA表达水平的变化。

Control指对照组；substances’ addition指栝楼仁二醇处理组；纵坐标为EZH1相对GAPDH的mRNA表达水平。

具体实施方式

实施例1

栝楼仁二醇的生理活性检测过程为：

将出生24h内的SD大鼠处死并取海马组织原代培养。将海马组织放在200目筛网上，用眼科剪剪小块过筛，经过1000rpm离心8min后倒掉上清液，加高糖DMEM培养基并加入10%胎牛血清，巴氏管吹打后种6孔板。培养条件为37^oC>EZH1的表达量进行定量分析。所使用的PCR条件为：95^oC预变性>oC>oC>oC>EZH1表达量与内参基因GAPDH的相对比值。